JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:35 dk. • September 30th, 2026
Test HIV-1 varyantı veya vahşi tip kontrolü ile enfekte edilmiş konak hücrelerden salınan progen virionları içeren kültür süpernatanlarını alın.
Test virüsü, replikasyon verimliliğini değiştiren ve progeni virion üretimini etkileyen bir gen varyantı taşımaktadır.
Süpernatantları; radyolojik olarak işaretlenmiş bir nükleotid, işaretlenmemiş bir nükleotid, bir RNA kalıbı, bir primer, kofaktörler, deterjan ve stabilizatörler içeren bir ters transkripsiyon karışımına ekleyin.
Deterjan virionları liz ederken ve ters transkriptazı (RT) serbest bırakırken, kalıp-primer kompleksinin oluşmasını sağlamak için inkübe edin.
RT, radyolojik olarak işaretlenmiş nükleotidi dahil ederek şablon-primer kompleksinden DNA sentezler.
Numuneleri nükleik asit bağlayıcı bir membrana aktarın ve radyolojik olarak işaretlenmiş DNA'yı immobilize etmek için havada kurutun.
Bağlanmamış bileşenleri uzaklaştırmak için ajitasyon altında tampon ve etanol ile tekrarlayan yıkamalar yapın.
Membranı havada kurutun ve sarın. Radyasyona duyarlı bir ekrana maruz bırakın ve sinyalleri bir fosforimager kullanarak tespit edin.
Testte saptanan azalmış sinyal, kontrole kıyasla azalmış virion üretimini yansıtan daha düşük RT seviyelerin
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin