JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 4:36 dk. • September 30th, 2026
Antibiyotik direnç geni taşıyan lentivirüslerle başlayın.
Kalıntıları ayırmak için santrifüjleyin. Virüsleri içeren süpernatantı toplayın ve sürfaktan içermeyen bir membrandan geçirin.
Bu, kontaminantları tutarken lentivirüslerin geçmesine olanak tanır.
Virüsleri konsantre etmek için ultrasantrifüj yapın. Süpernatantı uzaklaştırın ve virüsleri yeniden süspand etmek için tampon ekleyin.
Ardından süspansiyonu bir mikrocentrifüj tüpüne aktarın ve vorteksleyin.
Kabarcıkları gidermek için santrifüjleyin. Ardından, virüsleri fare embriyonik kök hücreleri içeren bir enfeksiyon ortamına ekleyin ve karıştırın.
Virüs-hücre temasını artırmak için santrifüjleyin, ardından inkübe edin.
Virüsler, genomlarını hücrelerin içine aktarır.
Besiyerini uzaklaştırın, taze besiyeri ekleyin ve inkübe edin.
Viral genom DNA'ya dönüştürülür ve konak genoma entegre olur; bu da antibiyotik direnç proteininin sentezini yönlendiren mRNA üretimini sağlar.
Besiyerini, seçilim antibiyotiği eklenmiş taze besiyeri ile değiştirin ve inkübe edin.
Antibiyotik direnç proteinini eksprese eden hücreler hayatta kalır ve böylece stabil, virüsle enfekte edilmiş hücreler elde edilir.
Hücreleri bir hemositometre ile sayın.
Enfeksiyondan bir
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin