JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:53 dk. • September 30th, 2026
İşleme, vaccinia virüsü ile enfekte edilmiş ve bir rekombinasyon plazmid vektörü ile transfekte edilmiş epitel hücreleri ile başlayın.
Vektör, viral bir promotör altında yeşil floresan işaretli bir hedef gen ve kırmızı floresan işaretli bir metabolik seleksiyon geni taşımaktadır.
Viral DNA replikasyonu sırasında, plazmit kaseti viral genoma yerleştirilir.
Hücreleri serumsuz medyada toplayın.
Hücreleri lizlemek ve virüsleri salmak için dondurma-çözme döngüleri kullanın.
Lizatın seri dilüsyonlarını hazırlayın.
Ayrı bireysel plaklar elde etmek için taze epitelyal hücreleri seyreltilmiş lizat ile enfekte edin.
Hücre sağkalımı için serum içeren ortam ve metabolik seçilim reaktifi ekleyin, ardından inkübe edin.
Seçim reaktifi, nükleotid sentezinde yer alan enzimleri inhibe eder. Sadece metabolik seçim genini taşıyan enfekte hücreler, nükleotid sentezine izin veren alternatif bir enzim eksprese ederek hayatta kalabilir.
Besiyerini uzaklaştırın ve floresan mikroskobu altında gözlemleyin.
Bir plağın hem kırmızı hem de yeşil floresans göstermesi, kaset entegrasyonunun başarılı olduğunu ve hedef genin ekspresyonunu gösterir.
Serum içermeyen ortamda, BS-C-one hücrelerinin bir monotabakasını vaccinia virü
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin