JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:27 dk. • September 30th, 2026
Enfekte tütün yapraklarından saflaştırılmış mutant virüs benzeri parçacık (VLP) süspansiyonları ile başlayın.
Mutant VLP'ler, viral kılıf proteininin belirli konumlarına genetik olarak yerleştirilmiş sistein kalıntıları içerir.
Maleimid konjuge bir floresan boya ekleyin ve karışımı karanlıkta inkübe edin.
Maleimid sadece VLP yüzeyinde açıkta olan sistein kalıntılarına bağlanırken, protein yapısı içinde gömülü olan sisteinler erişilemez kalır ve etiketlenmeden kalır.
Tepkimeye girmemiş boyaları bloke etmek ve spesifik olmayan etiketlemeyi önlemek için bir indirgen ajan ekleyin.
Numuneleri gözenekli bir reçine ile doldurulmuş tuz giderme kolonlarına yükleyin, ardından işaretli VLP'leri saflaştırmak için santrifüjleyin.
Tepkimeye girmemiş boyalar ve indirgeyici ajanlar gözenekli reçine boncuklarının içine difüze olarak burada tutulurken, daha büyük olan VLP'ler gözeneklerin dışında kalır ve önce elüye olur.
Floresan işaretli VLP'ler artık jel elektroforezi kullanılarak analiz edilebilir.
Jeldeki floresan bantlar, yüzeyde serbest kalan sistein kalıntılarına sahip işaretli mutantları göstermektedir.
MRFV yaban tipi ve cys-mutasyona uğramış kılıf protein genlerini taşıyan patates virüsü-X tabanlı
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin