JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:41 dk. • September 30th, 2026
Ekspresyon plazmidinin yanı sıra lac operatörü tarafından düzenlenen T7 polimeraz genini taşıyan, mühendislik ürünü E. coli hücrelerinin başlangıç kültürünü içeren bir tüp alın.
Plazmid, bakteriyofaj Qβ'den türetilmiş bir kılıf proteinini kodlayan bir gen taşımaktadır.
Bu gen, bir T7 promotörü ve lac operatörü tarafından regüle edilir.
Kültürü, içinde ortam bulunan bir erlene aktarın.
Bakteriyel büyümeyi teşvik etmek için çalkalamalı inkübasyon yapın.
lac represörünü inaktive ederek T7 polimeraz ekspresyonunu tetikleyen bir allolaktoz sentetik analoğu ekleyin.
Ardından T7 polimeraz, plazmid üzerindeki T7 promotörüne bağlanır ve kılıf proteini genini transkribe eder; bu gen, kılıf proteinini üretmek üzere transle edilmektedir.
Bu kılıf proteinleri, bulaşıcı olmayan iskeleler oluşturan virüs benzeri parçacıklar (VLP'ler) şeklinde kendi kendine birleşir.
Kültürü santrifüj şişelerine aktarın.
Hücreleri çöktürmek için santrifüj edin.
Süpernatantı atın ve peleti bir tüpe aktarın.
Hücre içi VLP'leri içeren hücre peleti, saflaştırma için hazırdır.
Q-Beta bakteriyofaj ekspresyon prosedürüne başlamadan önce, tezgah alanını 1:1 çamaşır suyu:etanol çözeltisi ile silin. Aseptik bir ortamda, E.coli BL21'in
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin