JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:51 dk. • September 30th, 2026
Kapsid yüzeyinde açıkta disülfit bağları bulunan virüs benzeri partiküllerle (VLPs) başlayın.
Kapsid yapısını korurken serbest tiyol grupları oluşturmak için disülfit bağlarını koparacak bir indirgeyici ajan ekleyin.
Tiyol reoksidasyonunu önlemek için, redükte edilmiş VLP'leri tiyol-reaktif bir polietilen glikol veya PEG bağlayıcı ile birleştirin.
PEG bağlayıcı, iki kovalent bağ oluşturarak her tiyol çiftini yeniden köprüler.
Bu kovalent konjugasyon aynı zamanda UV aydınlatması altında parlak sarı görünen floresan bir yapı oluşturur.
Tam konjugasyonun gerçekleşmesi için karışımı uzun bir süre döndürün.
Santrifüj filtrasyonu kullanarak, bozulmamış konjugatları korurken reaksiyona girmemiş küçük molekülleri uzaklaştırarak PEGylated VLP'leri saflaştırın.
Floresan bir kılıf proteini bandı ile belirtilen PEG tutunmasını tespit etmek için indirgenmemiş SDS-PAGE gerçekleştirin.
Yapısal bütünlüğü, PEGillenmiş ve PEGillenmemiş VLP'ler için benzer bantların sağlam VLP'lerin varlığını doğruladığı natif agaroz jel elektroforezi kullanarak değerlendirin.
Bu protokol, görüntüleme veya hedefli taşıma uygulamaları için uygun olan floresan işaretli, PEG-fonksiyonelleştirilmiş VLP'ler sağlar.
Bu şema, gösteri
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin