JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 3:06 dk. • September 30th, 2026
Adherent, virüs geçirgen bir hücre monokatmanı ile başlayın.
Hücreleri yıkayın ve ardından onları ayırmak için bir çözücü ajan ekleyin.
Santrifüjleyin ve süpernatanı atın. Kalan besiyerini uzaklaştırmak için hücreleri yıkayın.
Hücreleri tamponlu salinde yeniden süspande edin, ardından hücreleri bir küvete aktarın.
Bakteriyel yapay kromozomda taşınan tam uzunlukta bir Japon ensefalit virüsü (JEV) cDNA klonundan transkribe edilen RNA'yı aktarın.
RNA girişine izin vermek için hücre membranını geçici olarak geçirgenleştirmek amacıyla elektrik darbeleri uygulayın.
Hücrelerin toparlanmasını bekleyin, ardından onları bir kültür ortamına aktarın.
İletilen RNA, yeni virionlar üretmek için doğal viral RNA'yı taklit eder.
Hücreleri seri olarak seyreltin ve taze hücre monokatmanlarına ekimleyin.
Virionların komşu hücreleri enfekte etmesine izin vermek için inkübe edin.
Agaroz ortamı ile üzerini kaplayın ve inkübe edin. Ortam yarı katı bir tabaka oluşturarak viral yayılımı yakın hücrelerle sınırlandırır.
Enfekte hücreler lizis olur ve belirgin plaklar oluşturur; bu durum, enfeksiyöz JEV'nin başarıyla kurtarıldığını doğrular.
Kap başına 3 milyon hücre olarak ekilmiş ve 150 milimetrelik kaplarda 24 saat boyu
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin