JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:36 dk. • September 30th, 2026
Bir virüse özgü, rekombinant olarak eksprese edilmiş, RNA içermeyen bir nükleoprotein-fosfoprotein kompleksi ile başlayın.
Nükleokapsid benzeri partiküllerin birleşmesini başlatmak için kompleksi virüse özgü RNA oligonükleotidleri ile inkübe edin.
Montaj sırasında viral RNA, fosfoprotein fragmanını yerinden eder ve böylece nükleoproteinin RNA'yı çevreleyerek nükleokapsid benzeri partiküller oluşturmasına olanak tanır.
Herhangi bir çökeltiyi uzaklaştırmak için numuneyi santrifüjleyin.
Gözenekli bir reçine ile doldurulmuş, önceden dengelenmiş bir boyut dışlama kromatografisi kolonunu alın ve süpernatanatı üzerine yükleyin.
Numune kolon boyunca akarken, büyük nükleokapsid kompleksleri gözeneklerden dışlanır ve ilk olarak elüe olur.
Orta büyüklükteki protein kompleksleri ve küçük RNA molekülleri gözeneklere girer ve daha geç elüe olur.
Belirgin piklerin olduğu bir elüsyon profili oluşturmak için elüatın absorbansını izleyin.
İlk pik birleşmiş nukleokapsidleri, ardından daha küçük protein komplekslerini ve serbest RNA'yı göstermektedir.
Doğrulama ve ileri analizler için nukleokapsid pikine karşılık gelen fraksiyonu toplayın.
Virüse özgü nükleokapsid montajı için, saflaştırılmış N0P kompleksini RN
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin