JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:37 dk. • September 30th, 2026
Tek zincirli bir RNA virüsü olan Zika virüsü ile enfekte edilmiş epitel hücreler içeren çok kuyucuklu bir plaka ile başlayın.
Enfeksiyon sırasında virüs, çift zincirli bir RNA veya dsRNA ara ürünü oluşturan RNA'yı salar.
Bu dsRNA ara ürünlerini tespit etmek için, hücreleri permeabilize etmek ve hücresel bütünlüğü korumak amacıyla besiyerini metanol ile değiştirin.
Metanolü uzaklaştırın ve bir tamponla yıkayın.
Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir bloklama çözeltisi ekleyin.
Viral dsRNA'ya özgü bir primer antikor ekleyin.
Primer antikörün viral dsRNA'ya bağlanmasına izin vermek için düşük sıcaklıkta, hafifçe sallayarak inkübe edin.
Bir tamponla durulayın, kırmızı florofora konjuge ikincil bir antikor ekleyin ve inkübe edin.
Sekonder antikorlar, primer antikorlara bağlanır.
Bir tamponla yıkayın, ardından çekirdeği boyamak için floresan bir DNA-bağlayıcı boya ekleyin.
Enfekte hücre içindeki işaretli viral dsRNA ara ürününü görselleştirmek için floresan mikroskobu altında gözlemleyin.
İmmünositokimya için, 12 kuyucuklu plakanın kuyucuklarındaki besiyerini uzaklaştırın ve her kuyucuğa bir mililitre metanol ekleyin. Hücrelerin 4 °C'de 30 dakika boyunca fikse olmasını sağlayın. Ar
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin