Name: Murin Pankreas Adacık İzolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 20 s
Description: Öğrenin fare pankreas adacık izolasyonunu kollajenaz enjeksiyonu ve Ficoll gradyanı kullanarak. Bu yöntem diyabetik NOD farelerine transplantasyon için canlı adacıklar hazırlar ve diyabet tedavisinde ileri araştırmalara olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Kollajenaz Hazırlık <ol><li> Son konsantrasyon, aşağıdaki tabloda gösterildiği gibi yapmak için bir 50 ml konik ve eklemek izolasyon tampon içine kollajenaz tartılır . Vorteks kollajenaz eritin. (12 farelere + 2 ekstra fareler = 14 farelerin x 5 ml / fare = 70 ml toplam kollajenaz çözüm) (70 ml x 0.5 mg / ml veya kollajenaz P toplam 0.3 mg / ml = 35 mg veya 21 mg) <table style="BORDER-RIGHT: #ddd 1px solid; BORDER-TOP: #ddd 1px solid; BORDER-LEFT: #ddd 1px solid; BORDER-BOTTOM: #ddd 1px solid; TEXT-ALIGN: left" border="0" width="80%"><tbody><tr><th style="font-size: 12px; border-bottom: #ddd 1px solid; text-align: left"> Gerginlik </th><th style="font-size: 12px; border-bottom: #ddd 1px solid; text-align: left"> Yaş </th><th style="font-size: 12px; border-bottom: #ddd 1px solid; text-align: left"> Kollajenaz P (mg / ml) </th><th style="font-size: 12px; border-bottom: #ddd 1px solid; text-align: left"> Süresi (dak) </th></tr><tr><td style="font-size: 12px"> C3H, Balb / C, B6 </td><td style="font-size: 12px"> &gt; 12 hafta </td><td style="font-size: 12px"> 0,8 </td><td style="font-size: 12px"> 17 </td></tr><tr><td style="font-size: 12px"> C3H, Balb / C, B6 </td><td style="font-size: 12px"> &lt;= 12 hafta </td><td style="font-size: 12px"> 0,5 </td><td style="font-size: 12px"> 13 </td></tr><tr><td style="font-size: 12px"> NOD, NOR OLMAYAN </td><td style="font-size: 12px"> &gt; 12 hafta </td><td style="font-size: 12px"> 0,8 </td><td style="font-size: 12px"> 17 </td></tr><tr><td style="font-size: 12px"> NOD, NOR OLMAYAN </td><td style="font-size: 12px"> &lt;= 12 hafta </td><td style="font-size: 12px"> 0,5 </td><td style="font-size: 12px"> 17 </td></tr></tbody></table> </li><li> Kollajenaz çözüm 2 ml cam şişe ve yeri içine buz üzerinde her koyun. Her kollajenaz eklemek 30g iğne ve buz (motor kapağı hazırlamak) 3 ml ile 5 ml şırınga yükleyin. </li></ol> Şişme <ol><li> Sadece diseksiyonu önce servikal dislokasyon hayvan kurban. Tamamen ıslak ETOH% 70 ile tüm vücut spreyi. Genital bölgede başlayan bir V-insision olun. Fare kuyruğu size bakacak şekilde çevirin. </li><li> Açık farenin sol tarafına bağırsak çıkarın. Bu, pankreas ve safra kanalı gösterecektir. </li><li> , Bağırsak girmek için kollajenaz çözümü için küçük bir cep bırakarak, safra yolları Kanalizasyona, küçük-bağırsak her iki tarafta bir hemostat kelepçe yerleştirin. </li><li> Pankreas, safra kesesi başlayan, safra yolları, 3 ml soğuk kollajenaz çözüm içeren bir 30g iğne ve 5 ml şırınga yoluyla şişirin. </li><li> Pankreas vücuttan çıkarın ve 2 ml kollajenaz çözüm içeren bir silikonlu flakon içine koyun. Bu adım, yağ ve bağ dokusu toplama en aza indirerek, hızlı ve mümkün olduğu kadar temiz olmalıdır . </li><li> Sonraki fare ile buz ve 3. adımı yineleyin Flakon yerleştirin. </li></ol> Sindirim <ol><li> Her flakon Seal ve 37 ° C su banyosu içine yerleştirin. 13-17 dakika (zaman gerginlik ve hayvanın yaşı ile değişir) inkübe edin. </li><li> Süre geçtikten sonra, şiddetle flakon sallayın. Pankreas ayrı düşmek gerekir. </li><li> 1000 ml steril bir beher içine büyük bir steril lavabo süzgeç vasıtasıyla her sindirmek dökün ve zorla yıkama tamponu ile ekran pipetle. Uygulama 50 ml conicals tüpler içine sindirir (3 pancreata/50 ml tüp: n = 12, son hacim 200 ml ve 4x50 ml tüpler dağıtmak için tampon yıkama yeterli kullanın). Seyreltme istenmeyen adacık sindirim önlemek için buz üzerinde ve hızla yapılmalıdır. </li><li> Spin: santrifüj Başlat. 1300 rpm ulaştığında, kapatın. </li><li> ~ 5 mL bırakarak, süpernatant aspire. Pelet aspire çok dikkatli olun. </li><li> Süspanse edin pelet şiddetle elinizle dokunarak, sonra 50 ml yıkama tamponu ekleyin. </li><li> Spin: santrifüj Başlat. 1300 rpm ulaştığında, kapatın. </li><li> Pelet ve yıkama 5 ml yıkama tamponu ile tekrar </li><li> 5 ml 15 ml konik transferi ve yukarıdaki gibi, aşağı doğru döndürün. </li><li> Süpernatantı mümkün olduğu kadar tamamen aspire. (Kalan tampon Ficoll yoğunluğu değişiklik neden olabilir.) </li></ol> Ficoll Hızlı gerçekleştirin. Uzun vadeli Ficoll maruz adacıklar için ZEHİRLİ. <ol><li> Pelet tamamen Ficoll (kesintisiz doku Ficoll tekrar süspansiyon için zor) eklemeden önce kırık emin olun. </li><li> Şiddetle vorteks Ficoll, yoğunluğu 1.108, 7 ml pelletini tekrar. </li><li> 1.096, 1.069, ardından 1.037: bu sırada kalan yoğunluklarının her Ficoll 2ml her yoğunluğu üst katman. </li><li> KAPALI break ile 4 derece 15 dakika 1800 rpm&#39;de döndür! </li><li> Spoid (steril p kullanarak ikinci kat adacıklar seçinLastic damlalık). Transfer tüm koleksiyonları, soğuk tampon 50 ml konik içeren ~ 25 ml. </li><li> Yıkama tamponu (adım 12-15 tekrar), yukarıdaki gibi, 3 kere yıkayın. </li><li> Içinde süspanse edin Islets 20 ml RPMI-1640 (% 10 FCS ve penisilin ve streptomisin, Hepes, MEM-NEAA içeren) ve hafifçe karıştırın. Sayımı için örnek 100 ul çıkarın. </li><li> 1 ml 1 ml dithizone medya ve içeren 35 mm Izgara plakası 100 ul aktarın. </li><li> Medya / plaka 30 ml toplam 160 mm plakalar, 37 ° C,% 7 CO 2 kuvöz, RPMI 1640 içerisinde kalan adacıklar inkübe edin. <img src="/files/ftp_upload/old/255_2008_8_24_3/255_Figure-01.png" alt="Şekil 1" width="220" height="194" /></li></ol>

murin pankreas adacık İzolasyonu

Murine Pancreatic Islet Isolation

Murin Pankreas Adacık İzolasyonu

Merhaba, ben Greg Zott. UCSF Diyabet Merkezi'ndeki Bluestone Laboratuvarı'ndayım ve bugün size fare adacıklarının izolasyon sürecini göstereceğim. Prosedür, C3 H donör faresinin pankreasına bir kollajenaz çözeltisinin enjekte edilmesini, ardından bu pankreasın çıkarılmasını, sindirilmesini, adacıkların bir yoğunluk gradyanı üzerinde saflaştırılmasını ve son olarak alıcımız olacak diyabetik bir NOD faresinin böbrek kapsülüne nakledilmek üzere elle seçilmesini içermektedir.Bu prosedüre başlamadan önce, ATE çözeltimizi modifiye edilmiş bir Hanks tamponu ile seyrelttik ve kullandığımız fare suşu olan C3 H'ye özgü konsantrasyonu ayarladık. Sindirimlerin 0,8 mg/mL kollajenaz çözeltisinde daha iyi olduğunu tespit ettik ve pankreası genişletmek için ortak safra kanalına enjekte etmek üzere bu çözeltiyi kullanacağız. Prosedürü bugün Diyabet Merkezi'nden Pavo Codre gerçekleştirecektir. Fareyi açacak, bağırsakları ortaya çıkaracak ve ardından ortak safra kanalına enjeksiyon yapacaktır.Tüyleri yatıştırmak için fareyi etanol ile spreyleyeceğiz ve ardından ayak parmağı sıkıştırma yöntemiyle farenin uygun şekilde sakrifiye edildiğini doğrulayacağız. Pavo şimdi midline insizyon ile fareyi açarak b

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

, Yüksek kalite ve insan adacıklar uygun miktarda sağlamak başarılı bir adacık nakli için önemli önkoşullar biridir. Bu video, adım adım tarif insan pankreas adacık izolasyonu için prosedürler: değiştirilmiş bir otomatik yöntemi kullanılarak (bölüm I sindirim ve pankreas dokusu toplanması).

İnsan Pankreas Adacık İzolasyonu: Bölüm I: Sindirim ve Pankreas Doku Koleksiyon

, Yüksek kalite ve insan adacıklar uygun miktarda sağlamak başarılı bir adacık nakli için önemli önkoşullar biridir. Bu video, adım adım tarif insan pankreas adacık izolasyonu (Bölüm II: insan adacıklar arıtma ve kültür) için prosedürleri değiştirilmiş bir otomatik yöntemi kullanarak.

İnsan Pankreas Adacık İzolasyonu: Bölüm II: İnsan Islets saflaştırılması ve Kültür

Fare adacık izolasyon ayrıntılı bir açıklaması kolajenaz nötr proteaz ve saflaştırılmış bir bileşimi in situ pankreatik kanal kanülasyon ve perfüzyon tekniği kullanılarak tarif edilir.

Langerhans İzolasyonu Fare Islet Saflaştırılmış Collagenase ve Nötr Proteaz bir kombinasyonu kullanılarak

Langerhans Adacıkları olarak da adlandırılan pankreas adacıkları, glikoz regülasyonu ve diğer önemli biyolojik işlevler için hormonlar üreten bir endokrin hücre kümesidir. Bu protokol, ekzokrin pankreas dokusunu sindirmek için önce Ampulla of Vater yoluyla kollajenaz perfüze ederek pankreas adacıklarını izole etmek için bir yöntemi ve adacıkları farelerden saflaştırmak için basitleştirilmiş bir yoğunluk gradyan santrifüjünü açıklar.

Kollajenaz Perfüzyonu ile Pankreas Adacıkları İzolasyonu: Pankreas Adacığı Hücrelerini İzole Etmek İçin Enzimatik Bir Yöntem

Burada, tip 2 diyabetin fare modelinden adacıkların izolasyonu için bir protokol, Leprdb ve 2 foton mikroskobu kullanan sağlam adacıklardan insülin sekresyonunun ölçümü için bir canlı hücre testinin ayrıntılarını sunuyoruz.

Lepr<sup&gt; Db</sup&gt; Tip 2 Diyabet Fare Modeli: Bozulmamış Islets Of Pankreas Adacık İzolasyonu ve Canlı hücre 2-Foton Görüntüleme

diyabet araştırma alanı için kritik zorluklar adacık β-hücre çoğalmasını düzenleyen ve β-hücre yenilenmesini teşvik etmek için yöntemler geliştirmek moleküler mekanizmalarını anlamak için vardır. Burada yüksek içeriği tarama yöntemi belirlemek ve küçük moleküllerin β-hücresi replikasyon teşvik aktivitesi sunulmuştur değerlendirmek.

Bir Yüksek içerik<em&gt; İn Vitro</em&gt; Pankreas Adacık β-hücre çoğaltma Keşif Platformu

Neonatal farelerden sağlam adacıklar izole edilmesi için bu tarifnamede, bir protokol açıklar. Pancreata kısmen yıkama ve elle toplama ile, ardından kollajenaz ile sindirilir. 20-80 adacık kümeleri birkaç adacık çalışmalar için uygun yeni doğan farelerin, gelen pankreas başına elde edilebilir.

Yenidoğan Fare Pankreas gelen Fonksiyonel Adacık etkili İzolasyonu

Bu adacık izolasyon protokolü ekroz dokuyu sindirmek için kollajenaz enjeksiyonunun yeni bir rotasını ve adacıkları farelerden arındırmak için basitleştirilmiş bir degrade prosedürünü tanımlamıştır. Enzimatik sindirim, degrade ayırma/arıtma ve adacık el toplama içerir. Başarılı yalıtım fare başına 250-350 yüksek kaliteli ve tam işlevsel adacıklar verebilir.

Farelerden Pankreas Adacık İzolasyon için Basit Bir Yüksek Verimlilik Protokolü

Burada potansiyel diyabetojenik xenobiotic kimyasallar tanımlamak için xenobiotics tarafından ROS indüksiyon süzmek için fare pankreas adacık hücreleri izole etmek için bir iletişim kuralı mevcut.

Bir fare pankreas adacık hücre tabanlı tarama diyabetojenik çevresel kimyasallar için

Burada, pankreas adacık hücreleri gibi heterojen hücre popülasyonlarında kalsiyum dinamiğinin görüntülenmesi ve ölçülmesi için bir protokol saklıyız. Floresan muhabirler adacık içindeki hücrelerin periferik tabakasına teslim edilir, daha sonra hareketsiz hale getirilir ve görüntülenir ve floresan yoğunluğunun dinamiğinin hücre başına analizi yapılır.

Fare Pankreas Adacık Hücrelerinin Alt Popülasyonlarında Görüntüleme Kalsiyum Dinamiği

Bu çalışma, fare pankreasındaki fonksiyonel birincil adacıqları ve asinar hücreleri verimli bir şekilde çıkaran basitleştirilmiş bir yöntem geliştirdi ve Akut Pankreatit Kaynaklı Diyabetin patogenezinde hücrelerarası iletişimi incelemek için değerli bir araç sağladı.

Farelerden Birincil Adaçik Ve Birincil Pankreas Asinar Hücrelerinin Eşzamanlı İzolasyonu İçin Basit ve Hızlı Bir Yöntem

Öğrenin fare pankreas adacık izolasyonunu kollajenaz enjeksiyonu ve Ficoll gradyanı kullanarak. Bu yöntem diyabetik NOD farelerine transplantasyon için canlı adacıklar hazırlar ve diyabet tedavisinde ileri araştırmalara olanak tanır.

Murin Pankreas Adacık İzolasyonu

Daha fazla video keşfet