Name: Engineered Kalp Doku İmplantasyonu takiben İmmün Yanıtların Değerlendirilmesi (EHT) Biyoparlaklık Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-01T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: Öğrenin, sıçanlarda mühendislik kalp dokusu (EHT) implantasyonu sonrası immün yanıtları biyoparlaklık görüntüleme ile uzunlamasına değerlendirmeyi. Bu yöntem, greft sağkalımını invaziv olmayan şekilde izlemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Sonja Schrepfer, Lenard Conradi ve Arne Hansen Deutsche Forschungsgemeinschaft (SCHR992/3-1, SCHR992/4-1, CO 858/1-1, HA 3423/3-1 DFG) fon aldı. Bu çalışma aynı zamanda, Avrupa Birliği Thomas Eschenhagen (EUGeneHeart ve Angioscaff) hibe tarafından desteklenen oldu.

1. EHT Üretimi ve Kültür Koşullar Fibrin EHT imalatı başka yerde 4 açıklandığı gibi yapıldı. Kısacası, implantasyon amaçlı fibrin tabanlı EHT oluşturmak için, bir master karışımı yenidoğan ROSA / lusiferaz LEW transgenik sıçan kalpleri, sığır fibrinojen ve Matrigel izole hücreler içeren hazırlanmıştır. Agaroz döküm kalıpları, 6 kuyu kültür yemekleri yerleştirilen teflon ayırıcılar kullanılarak hazırlanmıştır. Agaroz katılaşma sonra, ayırıcılar çıkarıldı ve silikon yazılan rafları, kalıplar içine ulaşan mesajların kültür kaplarına yerleştirildi. EHT oluşturmak için, Mastermix kısaca trombin hesaplanan miktarı ile karıştırılır ve kalıp pipetlenir. Fibrinojenin polimerizasyonu sonra, mesaj için yapışmış EHTs silikon rafları hafifçe ölçüye yeni 6-kuyu hücre kültür kaplarına aktarılır ve 37 ° C'de,% 7 CO 2 hücre kültürü inkübatör muhafaza agaroz döküm kalıpları çıkarıldı hücre kültür ortamı. EHT on gün kadar hücre kültürü şartlar altında tutuldu. Bu zaman dilimi boyunca, yenidoğan sıçan kalp hücrelerinin uzamış birbirine başladı ve silikon mesajları arasındaki kuvvet çizgileri boyunca hizalayın. Implantasyon zamanda silikon mesajları saptırma, spontan tutarlı kasılmalar gözlendi. 2. EHT İmplantasyon EHT implantasyon allojenik bağışıklık yanıtının araştırılması immünkompetan Brown Norveç (BN) sıçanlarda, ya da immünyetmezligi çıplak sıçanlarda yapıldı. BN ve çıplak sıçanlarda ağırlığı 100 - 150 g Charles River Almanya (Sandhofer Weg 7, D-97.633 Sulzfeld) satın alınan ve geleneksel koşulları altında, beslenen standart sıçan yemi ve su reklam libidum alır. Immünyetmezligi sıçanlarda steril yataklar, kafesleri, ve sterilize su kullanılan yerleştirilmiştir. Alman etik komitesi ve hayvan işlemleri onaylanmış. Tüm cerrahi aletler kullanmadan önce sterilize edilir. Implantasyon prosedürü şu şekilde yapılır: Rat indüksiyon odası (% 2.5-3) izofluran ile anesthesized. İnsan izofluran için maruz kalma, bir aşağı hava akışı tablosu veya non-sirkülasyon kaput çalışan düşebilir. Vücut ısısı, cerrahi işlem sırasında korunur. <ol><li> Karın bölgesinde Tıraş ve gözleri anestezi sırasında kurumasını önlemek için göz merhemi geçerlidir. </li><li> Sırtında sıçan yerleştirin ve anestezi tutmak için burun ve ağız içinde bir facemask yerde. </li><li> Betadine ve daha sonra% 80 etanol kullanarak karın bölgesi dezenfekte edin. Traş alanının merkezine temiz kirli Swab, saçlı alanda dışa doğru hareket. </li><li> Sıçan yeterli anestezi olduğundan emin olmak için arka ayaklarının kısma refleksleri kontrol edin. </li><li> Hayvan Örtüsü ve karın açmak için iki adımda cilt ve kas ayıran orta hat abdominal kesi gerçekleştirmek. Sıcak boncuk sterilizasyon, cilt ve kas açılış arasındaki kullanılır. </li><li> Isıtılmış bir tuzlu nemli toz ücretsiz eldiven bağırsak yerleştirin. Bağırsakların çevresinde nem kaybını önlemek için eldiven katlayın. </li><li> Yağ dokusu çıkarın ve dalak maruz. </li><li> Forseps ile büyük omentum gözünüzde canlandırın ve yayılmıştır. </li><li> Büyük omentum üzerine silikon mesaj ve transfer askıya EHT dikkatlice kesin. </li><li> EHT etrafında büyük omentus sarın ve iki tek 7-0 prolen sütür (Ethicon, Norderstedt, Almanya) kullanılarak düzeltme </li><li> Sonraki bağırsaklar karın içine taşıyın. </li><li> Karın prewarmed steril tuzlu su ile yıkayın. </li><li> 6-0 prolen çalışan dikişler (Ethicon, Norderstedt, Almanya) ile karın duvarı kas tabakası kapatın. </li><li> Cilt kapatmak için sütürlerinin 5-0 prolen (Ethicon, Norderstedt, Almanya) kullanın. </li><li> Rat anestezi hala iken, subkutan 5 mg / kg Carprofen enjekte. </li><li> Prosedürü bu tür bir analjezik (örneğin metamizol olarak) 3 gün transplantasyon sonrası için ağrı kesici ilaçlar için içme suyu (100 ml başına 50 mg metamizol) eklenir yeterli analjezi sağlamak. </li></ol> 3. EHT ardından İmplantasyon Biyoparlaklık Görüntüleme IVIS bio platformu (Xenogen, Alameda, CA, USA), non-invaziv in vivo biyoparlaklık görüntüleme için kullanılır ve sonuç IVIS Yaşam Resim (Xenogen) yazılım paketi kullanılarak analiz edilmektedir . Görüntüleme günde 2 saat postoperatif başlangıç ​​yapılır. Indüksiyon odasına kullanarak - (3% 2.5) izofluran ile sıçan anestezisi. <ol><li> Provo-İyot, bir sonraki kullanım% 80 etanol, bu adımı üç kez tekrarlayacak ve yaygın karın ve göğüs bölgesi dezenfekte edin. </li><li> Ip, d-luciferase (375 mg / kg vücut ağırlığı Xenogen) enjekte edilir </li><li> Anestezi sıçanlarda IVIS görüntüleme odası (en fazla 4 fareler aynı zamanda analiz edilebilir) içine yerleştirin. </li><li> L sinyal şiddeti değerlendirinuc + fotonlar / sn / cm 2 / steridianin başlangıçta ilgi bölge (ROI) (120 dakikası implantasyon sonrası) birimi içinde ve gün 1, 2, 3, 5, 7, 10, ve hafta 2 EHT içinde hücreler, 3 ve 4. Zirve sinyali (d-luciferase enjeksiyondan sonra yaklaşık 20 dakika) dikkat edin. </li></ol> Zamanla sinyal yoğunluğu gösteren bir grafik (Excel) oluşturun. 4. BLI Sonuçlar Korelasyon ve ELISPOT EHT nakli sonrası bağışıklık sistemi BN ve immünyetmezligi çıplak sıçanlarda in vivo hücresel immün yanıtları incelendi. Alıcının hayvanların dalak EHT nakli alıcı splenositlerin izole etmek için 5 gün sonra hasat edildi. Cevapçı hücreleri IFN-γ ve IL-4 kaplı üretici protokolü (BD Biosciences) göre yapıldı ELISPOT testleri kullanarak Stimülatörü ve 5 x10 6 alıcı dalak gibi EHTs (Sigma Aldrich, St Louis, MO, ABD) mitomisin-inhibe araştırmak için plakalar TH1, TH2 tepki idi. IFN-gama ve IL-4 noktalar bağışıklık sistemi, model immünyetmezligi modele göre anlamlı düzeyde yüksek bulundu (IFN-γ: p = 0.001, IL-4: p = 0.023; Student t-testi). 5. Temsilcisi Sonuçlar: <img src="/files/ftp_upload/2605/2605fig1.jpg" alt="Şekil 1"> Şekil 1. BLI sonuçları ve ELISPOT korelasyon) hücresel bağışıklık sistemi Brown Norveç ve immünyetmezligi çıplak sıçanlarda in vivo immün yanıtları EHT implantasyon sonrası incelendi. Alıcı splenositlerin EHT implantasyon 5 gün sonra hasat edildi. IFN? ve IL-4 ekspresyonu cevaplayıcı hücreleri olarak uyarıcı ve 5x106 alıcı splenositlerin olarak mitomisin-inhibe EHT kullanarak ELISPOT testleri ile değerlendirildi. Th1 ve Th2 yanıtları immünkompetan modeli sırasıyla IFNγ ve IL-4 üretimi ile kanıtlanan immünyetmezligi modele göre anlamlı derecede yüksekti. b) Luc + EHTs immünkompetan BN fareler ya da immünyetmezligi çıplak sıçanlarda ya da daha fazla omentus naklediliyor. Hücre hayatta kalma boyuna BLI izledi. Nakledilen EHTs reddetti hayvanların oranı sunulmaktadır. Tüm BN sıçanlarda hücreleri T hücre eksikliği olan sıçanlarda hayatta iken hızla EHT nakli reddetti.

<ol><li>Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+myocardial+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Engineering myocardial tissue.</a> Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).</li>
<li>van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+transplantation+of+adipose+tissue-+and+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+the+infarcted+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart.</a> Transplantation. 87, 642-652 (2009).</li>
<li>Hakamata, Y., Murakami, T., Kobayashi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22Firefly+rats%22+as+an+organ%2Fcellular+source+for+long-term+in+vivo+bioluminescent+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">"Firefly rats" as an organ/cellular source for long-term in vivo bioluminescent imaging.</a> Transplantation. 81, 1179-1184 (2006).</li>
<li>Hansen, A., Eder, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Drug+Screening+Platform+Based+on+Engineered+Heart+Tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Development of a Drug Screening Platform Based on Engineered Heart Tissue.</a> Circ Res. , (2010).</li>
</ol>

Klinik uygulama önce kalp onarımı için EHT teknoloji, implantasyon sonrası hücresel ve matriks bileşenleri veya greft sağkalım immünojenitesini gibi temel sorular deneysel modellerde değerlendirilmesi gerekir. In-vivo biyoparlaklık görüntüleme transplantasyonu sonrası izleme hücrenin hayatta kalabilmek için yeni ve yararlı bir tekniği temsil eder . Biz başarıyla içeren fibrin tabanlı EHT oluşturulan olumlu lusiferaz (luc +) kurulmuş bir protokol 4 adaptasyon kalp hücreleri. Bu EHT alıcı sıçanların bü...

<ul><li> LEW-Tg (Gt (ROSA) 26Sor-luc) 11Jmsk sıçan (NBPR sıçan numarası 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/) </li><li> Sığır fibrinojen (% 0.9, Sigma F4753 stok solüsyonu: NaCl içinde 200 mg / ml artı aprotinin 5 mg / ml fibrinojen) </li><li> Matrigel (BD Bioscience 356.235) </li><li> DMEM (Biochrome F0415) </li><li> At serumu (Gibco 26.050) </li><li> Penisilin / streptomisin (Gibco 15140) </li><li> İnsülin (Sigma-Aldrich I9278) </li><li> Aprotinin (Sigma Aldrich A1153) </li><li> d-luciferase (Biosynth L-8220) </li><li> Enzim-linked immunosorbent spot (ELISPOT) tahlil plakaları (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99) </li></ul>

engineered kalp doku İmplantasyonu takiben İmmün yanıtların değerlendirilmesi (eht) biyoparlaklık görüntüleme

Bioluminescence Imaging for Assessment of Immune Responses Following Implantation of Engineered Heart Tissue (EHT)

Çeşitli kardiyak doku mühendisliği teknikleri, yerli veya biyoyapay ya iskele malzemeleri, örneğin fibrin ve kollajen gibi hidrojeller, kardiyak miyositler miyosit mono tabakaları 1 tuzak ve istifleme kullanarak iskele stratejileri de dahil olmak üzere geçmiş yıllarda takip edilmiştir . Bu kavramlar tehlikeye kalp fonksiyonu (örneğin miyokard enfarktüsü sonra) restorasyonu veya deneysel modellerde (örneğin tahmin toksikoloji ve madde taraması ya da hastalık modelleme) olarak hedefliyoruz. Mühendislik kalp dokusu (EHT) implantasyon sonrası hücre sağkalım hassas izleme biyoparlaklık görüntüleme (BLI) teknikleri 2-vivo kullanarak mümkün hale gelmiştir. Burada bir ateşböceği lusiferaz (3 ROSA / lusiferaz LEW Tg) her yerde ifade ile transgenik sıçan suşu fibrin tabanlı EHT nesil açıklar. İmplantasyon EHT implantasyon sonrası alıcı organizmanın bağışıklık yanıtlarını değerlendirmek için farklı sıçan suşlarının büyük omentum içine yapılır. BLI ve Enzim Bağlı İmmüno Nokta Tekniği (ELISPOT) bağışıklık yanıtlarının değerlendirilmesi için BLI kullanılabilirlik onaylayın tarafından oluşturulan sonuçların karşılaştırılması.

Bu video kullanımını gösterir<em&gt; In vivo</em&gt; Biyoparlaklık görüntüleme sıçanlarda Engineered Kalp Dokusu implantasyonu (EHT) sonra bağışıklık yanıtlarını okumak için.

Engineered Kalp Doku İmplantasyonu takiben İmmün Yanıtların Değerlendirilmesi (EHT) Biyoparlaklık Görüntüleme

Geçmiş on yıllarda, doğal veya ... kullanılarak gerçekleştirilen iskele stratejileri dahil olmak üzere çeşitli kardiyak doku mühendisliği teknikleri takip edilmiştir.

Aşağıdaki deneyin genel amacı, sıçanlarda mühendislik ürünü kalp dokusu veya EHT implantasyonundan sonraki immün yanıtları incelemek için in vivo biyolüminesans görüntüleme kullanmaktır. Bu işlem, öncelikle lusiferaz pozitif EHT'lerin üretilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, lusiferazı stabil olarak eksprese eden EHT'ler, alıcı sıçanların omentum majusuna nakledilir.Ardından, invaziv olmayan boylamsal EHT sağkalımını ve reddini izlemek için alıcı hayvanlarda in vivo biyolüminesans görüntüleme gerçekleştirilebilir. Bu model kullanılarak, örneğin akut reddin şiddeti ve kinetiği, gözlemlenen biyolüminesans sinyal yoğunluğunun zaman içindeki azalmasıyla ilişkilendirilebilir. Bu tekniğin histoloji gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, günlük ölçümlerin greft sağkalımının invaziv olmayan boylamsal değerlendirmesine olanak tanımasıdır.Bu yöntem, mühendislik ürünü kalp dokularının sağkalımı ve reddi hakkında bilgi sağlayabilir, ancak diğer sorular için de uygulanabilir. Örneğin, ehs metabolizması. Bili tekniği, bu tekniği günlük olarak uygulayan Christiana Parman tarafından gösterilecektir.Laboratuvarımda, implantasyon amacıyla fibrin tabanlı DHT oluşturmak için öncelikle Luciferase

bioluminescence-imaging-for-assessment-immune-responses-following

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Giderek artan bir ilgi ile kök hücre tedavileri, moleküler görüntüleme teknikleri transplantasyonu sonrası izleme kök hücre davranışı için idealdir. Lusiferaz muhabiri genler hücre sağkalım, konumu ve in vivo çoğalması non-invaziv, tekrarlayan değerlendirme sağladı. Bu video izlemek için yaşayan bir fare hESC çoğalması gösterecektir.

In vitro ve in vivo Biyoparlaklık Reporter Gen Görüntüleme İnsan Embriyonik Kök Hücreleri

Teslimi için cerrahi işlem embriyonik kök hücre elde edilen endotel hücreleri iskemik hindlimb biyoparlaklık görüntüleme ile non-invaziv takibi ile gösterilmiştir.

Embriyonik Kök Hücre Tedavi Hindlimb İskemi Türetilmiş Endotel Hücreleri

İntrakraniyal GL261 hücrelerin içine C57BL / 6 farelerin implantasyon birçok insan glioblastoma multiforme işaretlerinden özetlemek malign gliomlar üretir. Biz bizi kullanmasına izin stably lusiferaz ifade GL261 hücreleri...

Müteakip 3D ile İntrakranial İmplantasyonu In Vivo Murin Gliomlar Bioluminescent Görüntüleme

, Zaman içinde canlı organizmaların hücre füzyon izlemek için bir yöntem açıklanmıştır. Yaklaşım kullanır...

Hücre Fusion Tespit Cre-ETOX P Rekombinasyon Yaklaşım In Vivo</em

In vivo biyolüminesans ve manyetik rezonans görüntüleme (i) ve (ii) post mortem histolojik analiz: Bu makale ile kemirgen beyinde hücresel greft multimodal görüntüleme için optimize edilmiş olaylar dizisi anlatılmaktadır. Tek bir hayvan bu görüntüleme yöntemleri birleştirerek, yüksek çözünürlüklü, duyarlılık ve özgüllük ile hücresel greft değerlendirilmesine olanak tanımaktadır.

Fareler ve Merkezi Sinir Sisteminde Kök Hücre İmplantasyonu Multimodal Görüntüleme

Bioluminescent Bakteriyel Görüntüleme<em&gt; In Vivo</em

Bakteriyel biyolüminesans gen kasetinin ifade eden memeli hücreleri...

Sitotoksisite Sürekli ve gerçek zamanlı izlenmesi için özerk Bioluminescent Memeli Hücre

Bir kemirgen modelinde, LAD ligasyonu ile uyarılmış miyokardiyal enfarktüsü tedavi etmeye yönelik bir biograft implantasyonu, geleneksel olarak iki açık kalp ameliyatı gerektirmiştir. Ölümlerini azaltmak ve hücreleri ile ilişkili solid ve jelatinli biyolojik matrisler tespiti için en uygun koşulları sağlamak amacıyla, minimal invaziv prosedürler geliştirilmiştir.

Rat Kalp Yetmezliği Hücre Terapisi: Miyokard İnfarktüsü için çift Torakotomi ve Hücreleri ile BioMatrix arasında Epikardiyal implantasyonu

Burada, kalp duvarında emici spektroskopisi gerçekleştirmek için perfkullanılmış kalplerinde intra ventrikül optik kateter kullanmanın bir yöntemini tanıtıyoruz. Elde edilen veriler, doku oksijen geriliminin yanı sıra substrat kullanımı ve membran potansiyeli ile aynı anda bu her yerde yapılan hazırlıkta kardiyak performans önlemleri ile ilgili güçlü bilgiler sağlar.

Perfkullanılmış Mammalin kalpleri transmural absorbance spektroskopisi kullanarak hücresel metabolizmayı Izleme için kalp içi yan ateş ışık kateter

Kardiyak hücreleri ve dokuyu kontrol etmek için ışığın kullanılması, temassız stimülasyonu mümkün kılar, böylece hücrelerin doğal durumunu ve işlevini korur, bu da onu hem temel araştırma hem de terapötik uygulamalar için değerli bir yaklaşım haline getirir.

Genetik Olmayan Optik Stimülasyon Yoluyla Ca2+ Yayılımını İncelemek için Kardiyak Mikrofizyolojik Bir Sistem

Bu makale, 29 G x 88 mm'lik bir iğne kullanılarak miyokard enfarktüsünün sıçan modellerinde ekokardiyografi kılavuzluğunda intramiyokard enjeksiyonları için optimize edilmiş bir protokolü detaylandırmaktadır. Bu teknik, terapötik ajanların doğrudan peri-enfarktüs bölgesine sağlam, kesin ve tekrarlanabilir bir şekilde verilmesini sağlar.

Miyokard Enfarktüsünün Sıçan Modelinde Hedefli ve Güvenilir İntramiyokardiyal Kök Hücre Dağıtımı için Ekokardiyografi Kılavuzluğunda Enjeksiyon

Öğrenin, sıçanlarda mühendislik kalp dokusu (EHT) implantasyonu sonrası immün yanıtları biyoparlaklık görüntüleme ile uzunlamasına değerlendirmeyi. Bu yöntem, greft sağkalımını invaziv olmayan şekilde izlemeyi sağlar.

Engineered Kalp Doku İmplantasyonu takiben İmmün Yanıtların Değerlendirilmesi (EHT) Biyoparlaklık Görüntüleme

Daha fazla video keşfet