Name: Feline Astrosit Hücre Hücre Hattı Oksidatif Stres için Tarama Testi, G355-5 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 53 s
Description: Öğrenin, kedilere ait astrosit hücre hattında oksidatif stres ölçüm yöntemini. CM-H2DCFDA floresan belirteci ve akış sitometrisi kullanılarak reaktif oksijen türleri nicel olarak değerlendirilir. Bu teknik nörobiyolojide nöroprotektif stratejiler geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz, cömert destek için bu çalışmaların ReadiSorb Ürünler teşekkür ederiz.

1. Hücre kültürü ve kedi astrositler H 2 O 2 ile tedavi <ol><li> 37 DMEM medya artı besin ile 75 cm 2 balon Kültür hücre hattı G355-5 ° C ve% 5 CO2,% 60 konfluent kadar (~ 5 gün) . Her 1-2 günde bir medya değiştirin ya da sağlıklı bir kültürü korumak için gerekli. </li><li> Medya çıkarın ve 2 ml% 0.25 tripsin ekleyin. 45 s pipetleme hücreleri Asansör - 1 dakika oda sıcaklığında (RT). </li><li> Süspansiyon, 10 ml medya içeren bir 15 ml konik tüp hızla aktarın. Yavaşça karıştırın. </li><li> Bir pelet elde etmek için 300 xg, 23 ° C'de 3 dakika santrifüjleyin. Pelet bozmadan süpernatantı atın. </li><li> 6-7 ml taze medya ekleyin ve hücreleri tekrar süspansiyon haline getirin. </li><li> 6 plaka her kuyuya hücre ~ 1 ml ekleyin. 2-3 ml medya her iyi ve% 80-90 konfluent kadar inkübe edin. </li><li> Medyada 100μM çözüm peroksit (H 2 O 2) hazırlayın. </li><li> Her iyi ortamı çıkarın ve ya 2 ml taze medya (kontrol), H 2 O 2 (tedavi) veya DPBS 2 ml 2 ml ile değiştirin. 37 ° C,% 5 CO 2 3 saat boyunca inkübe </li><li> Çözümler çıkarın ve hücreleri kaldırmak için 1 ml tripsin ekleyin. 0.5 ml DPBS içeren 1.7 ml Eppendorf tüp hücreleri aktarın. Bu adım, uzun süre tripsin kuluçka hücre ölümü önlemek için her yanı ayrı ayrı yapılmalıdır. </li><li> 3 dakika boyunca 300 xg'de Spin atın DPBS 1 ml supernatant ve tekrar süspansiyon. </li></ol> 2. ROS için Boyama <ol><li> Boyama için tüm adımları beyazlatma önlemek için az ışığa maruz kalma ile yapılmalıdır. </li><li> Pozitif kontrol için 50 mM CCCP 1 ul ekleyin. 37 ° ° C'de,% 5 CO 2 5 dakika boyunca. </li><li> H 2 O 2 grup 10 mM CM-H 2 DCFDA çözüm 5 ul ekleyin. 37 ° ° C'de,% 5 CO 2, 15-30 dk . Leke tuzlu örnek eklenir. </li><li> Artık leke çıkarmak için DPBS 2 ml örnek yıkayın. </li><li> Bir pelet elde etmek için 3 dakika boyunca 300 xg'de Spin. </li><li> DPBS 0.5 ml hücreleri tekrar Tuzlu su hariç, her bir örnek için 1 ul PI ekleyin. </li><li> 5ml akış sitometresinin tüp numune aktarın. </li><li> Akış sitometresinde çalıştırın. </li></ol> 3. Flow sitometri <ol><li> 525, 775 ve 620 nm ± 20 nm: 488 nm argon lazer ve aşağıdaki bant geçer ile donatılmış bir Beckman Coulter FC500 (veya eşdeğeri) örnek çalıştırın. </li><li> Uygun kontrollerin hazırlayın: lekesiz hücreleri, CM-H 2 DCFDA (negatif kontrol) PI, sadece çift lekeli, sadece boyanmış. </li><li> : Aşağıdaki histoplots FS vs SS, PI vs. CM-H 2 DCFDA bir protokol olun . Ayrıca aşağıdaki histogramlar olmalıdır: lekeleri karşılık gelen hücre sayısı vs FL1, FL2 ve FL3. </li><li> Örnekleri çalıştırmadan önce, ekipman, sıvıları ve atık kabını kontrol edin. Isınma en az 20 dakika için donatım. </li><li> Temizleyin ve ekipman üreticileri standartlara göre uygun boncuklar ile bir kalibrasyon gerçekleştirmek. </li><li> Protokolü seçin ve numunelerinin çalışılabilmesi için. </li><li> Daha önce de yaptığımız gibi araçları temizleyiniz. </li><li> Üreticileri standartlara göre vakum hattı temizleyin. </li><li> Akış kapatın ve baş / vakum hattı temiz. </li><li> Yazılım ve bilgisayarı kapatın. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar: Flow sitometri sonuçları FlowJo 7.6 ve leke kontrolleri yolluk objektif ayarlamak için kullanılır kullanılarak analiz edildi. Buna göre, sağlıklı hücreleri histogram ve ROS (oksidatif stresi) sol görünür bir hücre sağa doğru kayması olarak tespit edildi. Şekil 1 hidrojen peroksit etkisi ile sağlıklı bir kedi astrositler sonuçlarını gösterir. FL1 elde edilen veriler, ROS varlığını gösterir CM-H 2 DCFDA yoğunluğunu ölçmek için kullanılır oldu . Beklendiği gibi, daha yüksek bir miktarda ROS H 2 O 2 ile tedavi örneği tespit edildi. Bu soldan sağa doğru bir kayma floresan yoğunluğu olarak histogram görüntülenir. DMEM karşı DPBS ile tedavi edilen sağlıklı hücreleri karşılaştırarak, ROS miktarını (Şekil 2) anlamlı bir değişiklik yoktu. <img src="/files/ftp_upload/2841/2841fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1, oksidatif stres seviyeleri ve sağlıklı kedi astrositler, sağlıklı hücreler üzerinde H 2 O 2 etkisi Flow sitometri sonuçları. H 2 O 2 hücreleri hiçbir tedavi (DMEM) ile karşılaştırıldığında sağlıklı hücreler ROS düzeylerini artırdığını göstermektedir. <img src="/files/ftp_upload/2841/2841fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 DPBS ile 3 saat inkübe sağlıklı hücreleri tespit ROS düzeyleri Sitometrisi sonuçları.

<ol><li>Bukrinsky, M. I., Nottet, H. S., Schmidtmayerova, H. L., Dubrovsky, H., Flanagan, C. R., Mullins, M. E., Lipton, S. A., Gendelman, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+nitric+oxide+synthase+activity+in+human+immunodeficiency+virus+type+1+%28HIV-1%29-infected+monocytes%3A+implications+for+HIV-associated+neurological+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Regulation of nitric oxide synthase activity in human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1)-infected monocytes: implications for HIV-associated neurological disease.</a> J Exp Med. 181, 735-745 (1995).</li>
<li>Cadet, J. L., Ali, S., Epstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+oxygen-based+radicals+in+methamphetamine-induced+neurotoxicity%3A+evidence+from+the+use+of+CuZnSOD+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Involvement of oxygen-based radicals in methamphetamine-induced neurotoxicity: evidence from the use of CuZnSOD transgenic mice.</a> Ann N Y Acad Sci. 738, 388-3891 (1994).</li>
<li>Cathcart, R., Schwiers, E., Ames, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+picomole+levels+of+hydroperoxides+using+a+fluorescent+dichlorofluorescein+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Detection of picomole levels of hydroperoxides using a fluorescent dichlorofluorescein assay.</a> Anal Biochem. 134, 111-116 (1983).</li>
<li>Chao, C. C., Hu, S., Peterson, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glia%3A+the+not+so+innocent+bystanders%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurovirol%22%5BJournal%5D)">Glia: the not so innocent bystanders.</a> J Neurovirol. 2, 234-239 (1996).</li>
<li>Cooper, A. J., Kristal, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+roles+of+glutathione+in+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Multiple roles of glutathione in the central nervous system.</a> Biol Chem. 378, 793-802 (1997).</li>
<li>Cubells, J. F., Rayport, S., Rajendran, G., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methamphetamine+neurotoxicity+involves+vacuolation+of+endocytic+organelles+and+dopamine-dependent+intracellular+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Methamphetamine neurotoxicity involves vacuolation of endocytic organelles and dopamine-dependent intracellular oxidative stress.</a> J Neurosci. 14, 2260-2271 (1994).</li>
<li>Dawson, V. L., Dawson, T. M., Uhl, G. R., Snyder, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+immunodeficiency+virus+type+1+coat+protein+neurotoxicity+mediated+by+nitric+oxide+in+primary+cortical+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Human immunodeficiency virus type 1 coat protein neurotoxicity mediated by nitric oxide in primary cortical cultures.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 90, 3256-329 (1993).</li>
<li>Desagher, S., Glowinski, J., Premont, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+protect+neurons+from+hydrogen+peroxide+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Astrocytes protect neurons from hydrogen peroxide toxicity.</a> J Neurosci. 16, 2553-2562 (1996).</li>
<li>Dewhurst, S., Gelbard, H. A., Fine, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathogenesis+of+AIDS%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med+Today%22%5BJournal%5D)">Neuropathogenesis of AIDS.</a> Mol Med Today. 2, 16-23 (1996).</li>
<li>Dringen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+and+functions+of+glutathione+in+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Metabolism and functions of glutathione in brain.</a> Prog Neurobiol. 62, 649-671 (2000).</li>
<li>Dringen, R., Hamprecht, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutathione+restoration+as+indicator+for+cellular+metabolism+of+astroglial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glutathione restoration as indicator for cellular metabolism of astroglial cells.</a> Dev Neurosci. 20, 401-407 (1998).</li>
<li>Dringen, R., Pfeiffer, B., Hamprecht, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+the+Antioxidant+Glutathione+in+Neurons%3A+Supply+by+Astrocytes+of+CysGly+as+Precursor+for+Neuronal+Glutathione%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synthesis of the Antioxidant Glutathione in Neurons: Supply by Astrocytes of CysGly as Precursor for Neuronal Glutathione.</a> J Neurosci. 19, 562-569 (1999).</li>
<li>Everall, I. P. H. udson, L, R. W. K. erwin <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+absolute+levels+of+ascorbic+acid+and+unaltered+vasoactive+intestinal+polypeptide+receptor+binding+in+the+frontal+cortex+in+acquired+immunodeficiency+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Decreased absolute levels of ascorbic acid and unaltered vasoactive intestinal polypeptide receptor binding in the frontal cortex in acquired immunodeficiency syndrome.</a> Neurosci Lett. 224, 119-1122 (1997).</li>
<li>Gabriel, C., Camins, A., Sureda, F. X., Aquirre, L., Escubedo, E., Pallas, M., Camarasa, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+nitric+oxide+generation+in+mammalian+neurons+using+dichlorofluorescin+diacetate+and+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Determination of nitric oxide generation in mammalian neurons using dichlorofluorescin diacetate and flow cytometry.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 38, 93-938 (1997).</li>
<li>Gendelman, H. E., Genis, P., Jett, M., Zhai, Q. H., Nottet, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+model+system+for+HIV-1-induced+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">An experimental model system for HIV-1-induced brain injury.</a> Adv Neuroimmunol. 4, 189-1893 (1994).</li>
<li>Hayman, M., Arbuthnott, G., Harkiss, G., Brace, H., Filippi, P., Philippon, V., Thomson, D., Vigne, R., Wright, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotoxicity+of+peptide+analogues+of+the+transactivating+protein+tat+from+Maedi-Visna+virus+and+human+immunodeficiency+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neurotoxicity of peptide analogues of the transactivating protein tat from Maedi-Visna virus and human immunodeficiency virus.</a> Neuroscience. 53, 1-6 (1993).</li>
<li>Hirata, H., Ladenheim, B., Rothman, R. B., Epstein, C., Cadet, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methamphetamine-induced+serotonin+neurotoxicity+is+mediated+by+superoxide+radicals%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Methamphetamine-induced serotonin neurotoxicity is mediated by superoxide radicals.</a> Brain Res. , 677-6345 (1995).</li>
<li>Koka, P., He, K., Zack, J. A., Kitchen, S., Peacock, W., Fried, I., Tran, T., Yashar, S. S., Merrill, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+immunodeficiency+virus+1+envelope+proteins+induce+interleukin+1%2C+tumor+necrosis+factor+alpha%2C+and+nitric+oxide+in+glial+cultures+derived+from+fetal%2C+neonatal%2C+and+adult+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Human immunodeficiency virus 1 envelope proteins induce interleukin 1, tumor necrosis factor alpha, and nitric oxide in glial cultures derived from fetal, neonatal, and adult human brain.</a> J Exp Med. 182, 941-951 (1995).</li>
<li>Kong, L. Y., Wilson, B. C., McMillian, M. K., Bing, G., Hudson, P. M., Hong, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+the+HIV-1+envelope+protein+gp120+on+the+production+of+nitric+oxide+and+proinflammatory+cytokines+in+mixed+glial+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">The effects of the HIV-1 envelope protein gp120 on the production of nitric oxide and proinflammatory cytokines in mixed glial cell cultures.</a> Cell Immunol. 172, 77-83 (1996).</li>
<li>Koutsilieri, E., Gotz, M. E., Sopper, S., Sauer, U., Demuth, M., ter Meulen, V., Riederer, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+glutathione+and+cell+toxicity+following+exposure+to+neurotropic+substances+and+human+immunodeficiency+virus-1+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurovirol%22%5BJournal%5D)">Regulation of glutathione and cell toxicity following exposure to neurotropic substances and human immunodeficiency virus-1 in vitro.</a> J Neurovirol. 3, 342-349 (1997).</li>
<li>Lipton, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similarity+of+neuronal+cell+injury+and+death+in+AIDS+dementia+and+focal+cerebral+ischemia%3A+potential+treatment+with+NMDA+open-channel+blockers+and+nitric+oxide-related+species%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Similarity of neuronal cell injury and death in AIDS dementia and focal cerebral ischemia: potential treatment with NMDA open-channel blockers and nitric oxide-related species.</a> Brain Pathol. 6, 507-517 (1996).</li>
<li>Lipton, S. A., Yeh, M., Dreyer, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+current+models+of+HIV-related+neuronal+injury%3A+platelet-activating+factor%2C+arachidonic+acid+and+nitric+oxide%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Update on current models of HIV-related neuronal injury: platelet-activating factor, arachidonic acid and nitric oxide.</a> Adv Neuroimmunol. 4, 181-188 (1994).</li>
<li>Mills, E. M., Takeda, K., Yu, Z. X., Ferrans, V., Katagiri, Y., Jiang, H., Lavigne, M. C., Leto, T. L., Guroff, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+growth+factor+treatment+prevents+the+increase+in+superoxide+produced+by+epidermal+growth+factor+in+PC12+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Nerve growth factor treatment prevents the increase in superoxide produced by epidermal growth factor in PC12 cells.</a> J Biol Chem. 273, 22165-22168 (1998).</li>
<li>Peuchen, S., Duchen, M. R., Clark, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+glutathione+redox+state+in+adult+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Soc+Trans%22%5BJournal%5D)">Modulation of the glutathione redox state in adult astrocytes.</a> Biochem Soc Trans. 24, 449S-449S (1996).</li>
<li>Possel, H., Noack, H., Augustin, W., Keilhoff, G., Wolf, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2%2C7-Dihydrodichlorofluorescein+diacetate+as+a+fluorescent+marker+for+peroxynitrite+formation%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">2,7-Dihydrodichlorofluorescein diacetate as a fluorescent marker for peroxynitrite formation.</a> FEBS Lett. 416, 175-178 (1997).</li>
<li>Sagara, J., Makino, N., Bannai, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutathione+efflux+from+cultured+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Glutathione efflux from cultured astrocytes.</a> J Neurochem. 66, 1876-1881 (1996).</li>
<li>Stefano, G. B., Smith, E. M., Paemen, L. R., Hughes, T. K. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+gp120+associated+neurological+deficits%3A+a+potential+role+for+nitric+oxide+and+other+signal+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Neuroimmunology%22%5BJournal%5D)">HIV gp120 associated neurological deficits: a potential role for nitric oxide and other signal molecules.</a> Advances in Neuroimmunology. 3, 47-57 (1993).</li>
<li>Sundaresan, M., Yu, Z. X., Ferrans, V. J., Irani, K., Finkel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Requirement+for+generation+of+H2O2+for+platelet-derived+growth+factor+signal+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Requirement for generation of H2O2 for platelet-derived growth factor signal transduction.</a> Science. 270, 296-299 (1995).</li>
<li>Wang, X. F., Cynader, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+provide+cysteine+to+neurons+by+releasing+glutathione%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Astrocytes provide cysteine to neurons by releasing glutathione.</a> J Neurochem. 74, 1434-1442 (2000).</li>
<li>Wilson, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidant+defense+of+the+brain%3A+a+role+for+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Physiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Antioxidant defense of the brain: a role for astrocytes.</a> Can J Physiol Pharmacol. 75, 1149-1163 (1997).</li>
<li>Zenger, E., Collisson, E. W., Barhoumi, R., Burghardt, R. C., Danave, I. R., Tiffany-Castiglioni, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+cytometric+analysis+of+FIV-induced+injury+in+astroglia%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Laser cytometric analysis of FIV-induced injury in astroglia.</a> Glia. 13, 92-100 (1995).</li>
</ol>

Virüs sıklıkla önerilen bir mekanizma, nöronal hasara oksidatif stres 1, 4, 7, 9, 13, 15, 16, 18-22, 27, 31 neden olmuştur. Temelde, önerilen hidroksit, süperoksit anyon, nitrik oksit ve / veya nöronlar için toksik olan hidrojen peroksit, viral maruz kalma yoluyla glia (astrositler ve mikroglia) serbest reaktif oksijen radikalleri. Benzer şekilde, oksidatif stres de metamfetamin indüklenen nörotoksisite 2, 6, 17 büyük bir patolojik mekanizma olarak öne sürülmüştür. Grubumuzun etkileri MSS kötüye vi...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar (isteğe bağlı) </th></tr><tr><td> DMEM </td><td> Cellgro </td><td> 15-013-CV </td><td></td></tr><tr><td> MEM Vitaminler </td><td> Cellgro </td><td> 25-020-cl </td><td> % 1 (v / v) </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Hyclone </td><td> 17-605E </td><td> % 1 (v / v) </td></tr><tr><td> Esansiyel Olmayan Amino Asitler </td><td> Hyclone </td><td> 25-025-cl </td><td> % 1 (v / v) </td></tr><tr><td> FBS </td><td> Hyclone </td><td> SH30071.03 </td><td> % 20 (v / v) </td></tr><tr><td> Esansiyel Amino Asitler </td><td> Cellgro </td><td> 25-030-cl </td><td> % 0.2 (v / v) </td></tr><tr><td> 500ml vakum filtrasyon sistemi </td><td> VWR </td><td> 87006-076 </td><td></td></tr><tr><td> 15 ml konik tüpler </td><td> Şahin </td><td> 352097 </td><td></td></tr><tr><td> 75 cm 2 doku kültürü şişeleri </td><td> Şahin </td><td> 353136 </td><td></td></tr><tr><td> 6 sıra doku kültürü plakası </td><td> Şahin </td><td> 353224 </td><td></td></tr><tr><td> CM-H 2 DCFDA </td><td> Invitrogen </td><td> C6827 </td><td></td></tr><tr><td> Propidium İyodür (PI) </td><td> Sigma </td><td> P4170-10mg </td><td></td></tr><tr><td> Tripsin </td><td> Lonza </td><td> 17-160F </td><td></td></tr><tr><td> H 2 O 2 </td><td> Sigma </td><td> H6520 </td><td></td></tr><tr><td> HyQ Antibiyotik </td><td> Hyclone </td><td> SV30079.01 </td><td> % 0.1 (v / v) </td></tr><tr><td> G355-5 hücre </td><td> ATCC </td><td> CRL-2033 </td><td> Normal kedi beyin </td></tr></tbody></table>

feline astrosit hücre hücre hattı oksidatif stres için tarama testi, g355-5

Screening Assay for Oxidative Stress in a Feline Astrocyte Cell Line, G355-5

Nöronal hasara neden bir virüs sık önerilen mekanizma oksidatif stres. Astrositler Santral Sinir Sistemi (MSS) oksidatif stres kontrolünde önemli bir role sahip. Astrositler Reaktif Oksijen Ürünleri (ROS) nöronların yanı sıra korumaya nöronlar için homeostatik çevre korumaya yardımcı olmak. CM-H2DCFDA ROS varlığı için bir hücre geçirgen bir göstergesi. CM-H 2 DCFDA hücre floresan olmayan bir bileşik olarak girer ve hücresel esterazlar asetat grupları kaldırdıktan sonra floresan olur ve bileşik okside . Yeşil floresan olarak bulundu flow sitometri ile ölçülen hücreler, hücreleri oksidatif bir devlet sayısı bir göstergesidir. CM-H 2 DCFDA çok sayıda farklı ROS oksidasyona duyarlıdır. Bu testte ne olursa olsun, hangi oksijen ekrana oksidatif hücresel bir çevre için kullanılacak gibi ROS CM-H 2 DCFDA okside edebilir ilişkin özgüllük Bu eksikliği, bu bileşiğin bir patogenezinde soruşturmasının ilk aşamalarında kullanmak için değerli bir naip yapar ROS radikal ya da kombinasyon hücresel koşulları için sorumludur. Bir kere ROS, CM-H 2 DCFDA oksidasyonu ile mevcut sonra ek deneyler ROS veya Ross birlikte özellikle patogenezinde sürecinde yer aldığı belirlemek için yapılabilir olduğunu kurulmuştur. Bu çalışmanın sonuçları, bu testte G355-5 hücre içinde oksidatif ortamda tespit etmek için değerli bir test, bir olduğunu belirten, hidrojen peroksit CM-H 2 DCFDA bir artış ilavesi ile, tuzlu kontrollere göre tespit edildi floresan olduğunu göstermek kedi astrosit hücre hattı.

Oksidatif hücresel ortamlarda tespit etmek için bir tarama yöntemi, CM-H2DCFDA oksidasyon ölçmek için. Bir kez floresan olmayan bir floresan bileşik bir hücre, CM-H2DCFDA değişiklikler içinde okside. Bu değişiklik, floresan flow sitometri ile ölçüldü ve oksidatif bir ortamda hücrelerin sayısını gösterir.

Feline Astrosit Hücre Hücre Hattı Oksidatif Stres için Tarama Testi, G355-5

Virüsle tetiklenen nöronal hasarın sıklıkla öne sürülen bir mekanizması oksidatif strestir. Astrositler, ...'nın oksidatif stresini kontrol etmede önemli bir role sahiptir.

Astrositler, nöronlar için homeostatik bir ortamın korunmasına yardımcı olmanın yanı sıra nöronları reaktif oksijen türlerinden koruyarak merkezi sinir sisteminin oksidatif stresinin kontrol edilmesinde önemli bir rol oynarlar. Burada, astrositlerde oksidatif stresin analiz edilmesi için bir yöntem sunulmaktadır. Bu analizin nasıl çalıştığını göstermek amacıyla, hidrojen peroksit ve hücresel metabolizma sırasında tipik olarak üretilen ROS, analizle birlikte felin astrositlere uygulanır.Reaktif oksijen türleri için, hücre geçirgen belirteç CMH 2D CFDA hücrelere eklenir. CMH 2D CFDA hücreye floresan olmayan bir bileşik olarak girer ve burada hücresel esterazlar asetat gruplarını uzaklaştırır. Reaktif oksijen türleri mevcutsa, bileşik oksitlenir ve floresan özellik kazanır.Ardından hücreler hasat edilir ve floresans, akış sitometrisi ile analiz edilir. Floresan hücre sayısı, oksidatif durumda olan hücrelerin sayısını belirtir. Buradaki amaç elbette, farklı problar kullanarak hücrelerde hangi spesifik oksijen radikallerinin bulunduğunu tespit etmektir.Bu durum nöroloji alanında özellikle çok önemlidir ve nörologlar için yeni araştırma yollarının önünü açmıştır; çünkü temel olarak farkl

screening-assay-for-oxidative-stress-feline-astrocyte-cell-line-g355

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu videoda, kültürlenmiş organoidlerde oksidatif stresi görselleştirme tekniği açıklanmaktadır. Bu çalışma, farklı ROS modülatörleri ile tedaviden sonra bir organoidde bulunan çeşitli hücre tiplerinde ROS birikimine bağlı oksidatif stres seviyesinin anlaşılmasına yardımcı olur.

Floresan Prob Görüntüleme Testi: Reaktif Oksijen Türleri İndükleyici ile Tedavi Edilen Kültürlenmiş Bağırsak Organoid Hücrelerinde Oksidatif Stresi Görselleştirmek İçin Bir Teknik

Bu video, mitokondrilerinde bir floresan proteini eksprese eden genetik olarak değiştirilmiş astrositlerde mitokondriyal sağlığın değerlendirmesini göstermektedir. Protein, floresansı yeşilden kırmızıya değiştiği için mitokondriyal sağlıktaki değişiklikleri izlemeye yardımcı olur, bu da stres veya hasarı gösterir. Görüntüler çeşitli parametreler kullanılarak yakalanır ve analiz edilir.

Astrositlerde Mitokondriyal Stresin Floresan Temelli İzlenmesi

İskemik inme astrocytes etkilenen beyin bölgesi için belirli katkısını oksijen glikoz yetmezliği (OGD) maruz bir karmaşık olay çalışmaya zor olduğu. Bu makalede izole astrocytes elde etmek ve onların reaktivite ve nükleer silahların yayılmasına karşı OGD koşullar altında çalışma için bir metodoloji tanıtılmaktadır.

Astrocyte reaktivite ve nükleer silahların yayılmasına karşı Vitro iskemik benzeri koşullar altında izleme

Bu el yazması oksidatif stres xenobiotic kaynaklı incelenmesi için genetik olarak kodlanmış fluorogenic gazetecilere canlı hücre görüntüleme bir uygulamada kullanımını açıklar. Bu deneysel yaklaşım eşsiz kronolojik zamanmekansal çözünürlük, duyarlılık ve özgüllük eksiklikleri toksikolojik oksidatif stres tespiti için kullanılan geleneksel yöntemlerden birçoğu kaçınırken sunmaktadır.

Genetik olarak kodlanmış Fluorogenic sensörleri kullanarak toksikolojik oksidatif stres ilişkin Değerlendirmeler yaklaşımlar görüntüleme

Hücre morfolojisi, canlılık, yoğunluk, glutatyon ve UCP-2 seviyesini analiz eden retina pigment epitel hücrelerini H2O2ile tedavi ederek oksidatif stres modelinin geliştirilmesi ve kullanımı için bir protokol sunuyoruz. Transposon transfected hücreler tarafından salgılanan proteinlerin nöroretinal dejenerasyonu tedavi etmek için antioksidan etkisini araştırmak için yararlı bir modeldir.

Uyuyan Güzel Transposon Transposon Transfected İnsan Retina Pigment Epitel Hücrelerinde Oksidatif Stresin İndüksiyonu ve Analizi

İn vitro deneylere dayanarak, bu çalışma, PINK1 / Parkin sinyal yolunun önemli bir rol oynadığı mitopajiyi etkileyerek kardiyomiyositlerin oksidatif stres hasarını onarmada krosetinin mekanizmasını ortaya koymuştur.

H9c2 Miyokard Hücrelerinin Crocetin ile Oksidatif Stresten PINK1 / Parkin Yolu Aracılı Mitopaji ile Korunması

Bu protokol, yüksek verimli bir tarama yaklaşımı kullanarak bir floresan boya probu olarak dihidroetidyum (DHE) kullanarak hücre içi reaktif oksijen türlerini (ROS) ölçmek için yeni bir yöntemi açıklar. Protokol, üç farklı hepatoselüler karsinom hücre hattında hücre içi reaktif oksijen türlerinin (ROS) kantitatif değerlendirme yöntemlerini açıklar.

Dihidroetidyum (DHE) Floresan Boya Kullanılarak Reaktif Oksijen Türleri (ROS) Üretiminin Yüksek Verimli Tarama Değerlendirmesi

Hem oksitlenmiş hem de indirgenmiş glutatyon formlarının (sırasıyla GSSG ve GSH) miktar tayini, Orto-ftalaldehit (OPA) kullanılarak elde edilmiştir. OPA, GSH'ye konjuge edildiğinde yüksek oranda floresan hale gelir, ancak indirgenene kadar GSSG'yi konjuge edemez. Burada, normalizasyon için protein miktar tayini kullanarak her ikisini de ölçmek için multiparametrik bir tahlili açıklıyoruz.

İn Vitro Kültürlenmiş Memeli Hücrelerinde Orto-ftalaldehit Kullanılarak Oksitlenmiş ve İndirgenmiş Glutatyon Formlarının Hızlı Miktar Tayini

Burada, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerin fonksiyonel ön beyne özgü astrositlere farklılaşmasını kolaylaştıran bir protokolü açıklıyoruz. Bu, Frajil X Sendromu gibi nörogelişimsel bozuklukların patogenezinde glial hücrelerin rolünün araştırılmasını ve diğer beyin bozukluklarının modellenmesini sağlar.

Frajil X Messenger Ribonükleoproteinden Yoksun İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Astrositlerin Üretimi ve Karakterizasyonu

Bu video protokolü akış sitometrisi teknolojisi kullanılarak fiziksel (boyutu ve iç boyu) ve floresan özelliklerine bağlı olarak kök sinir hücrelerini yenilenebilir bir kaynaktan (NSC'lerde) den nöronal progenitör hücre üretimi ve daha sonra saflaştırma için yeni bir yöntem gösterilmektedir.

Neuroblast Test: Akım Sitometri Kullanımı Farklılaşan Nöral Kök Hücre Döl nöronal Progenitör Hücrelerinin üretilmesi ve zenginleştirilmesi için bir Testi

Öğrenin, kedilere ait astrosit hücre hattında oksidatif stres ölçüm yöntemini. CM-H2DCFDA floresan belirteci ve akış sitometrisi kullanılarak reaktif oksijen türleri nicel olarak değerlendirilir. Bu teknik nörobiyolojide nöroprotektif stratejiler geliştirmeye yardımcı olur.

Feline Astrosit Hücre Hücre Hattı Oksidatif Stres için Tarama Testi, G355-5

Daha fazla video keşfet