Name: 3D Görüntüleme ve Morfolojik Analizi Yetişkin Mouse Serebrovasküler Döküm (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-30T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: Keşfedin, yetişkin fare beynindeki serebrovasküler yapıları 3D görüntülemek için döküm tekniğini. Bu yöntem, damarsal ağaçları şeffaf beyin dokusunda detaylı incelemeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Voltaire Gungab yazının hazırlanmasında yardım için teşekkür ederim. Bu çalışma kısmen hibe tarafından desteklenen: H. Su Ulusal Sağlık Enstitüleri (T32 GM008440 EJ Walker, WL Genç ve H. Su R01 NS27713 WL Genç, P01 NS44155) ve R21 NS070153; ve Amerikan Kalp Derneği (AHA 10GRNT3130004 H. Su).

1. Kan damarları gelen Takas <ol><li> Fare 0.25 ml serum fizyolojik içinde sulandırılmış 10 mg / kg xylazine ile 100 mg / kg ketamin intraperitoneal anestezisi. </li><li> Anestezi pençe tutam hiçbir yanıt tarafından onaylandıktan sonra, diyafram üzerinden kesilmiş, sadece xiphoid işlemi aşağıda makas, göğsünde bir kesi yapmak için makas kullanmak ve dorsal ve ventral segment, göğüs boşluğu maruz ile göğüs kafesi arasında kesmek. Sternum ve komşu göğüs duvarı, katlama ve hemostat ile güvenli kalp Açığa. Perikard kesesi, kalp açığa çıkarmak için cımbız ile açın. </li><li> PBS artı heparin (5 adet / ml) sıcak su banyosu çözüm 37 ° C ve çıkışı künt 22 gauge iğne ile tüp sıcak bağlı perfüzyon pompası (basınç 100mmHg) açın </li><li> Kalbin apekse yakın, sol ventrikül içine iğne takın. Sistemik kan çıkışı hemen etkinleştirmek için sağ atrium ve açık kesmek kadar kan i yıkamaya devam edindolaşımdan kaldırılmış. </li></ol> 2. Damar Sistemi içine Döküm Agent Perfüzyon <ol><li> Mix süzülmüş MV bileşik 4 ml ile 5 ml OG seyreltici: Microfil (Akış Tech, Inc Carver, MA) üreticinin protokol başına döküm çözüm hazırlayın. Katalizör 450μl (% 5) (OG sertleştirici) ekleyin. Çözüm çalışma süresi 20 dakikadır, ancak uygun viskozite sağlamak için kullanmadan önce hemen karıştırın. </li><li> 10ml şırınga içine ajan çözüm döküm Çekme 20 künt bir iğne, şırınga takın ve çözümü ile iğne doldurun. </li><li> Sol ventrikül içine kan kızarma için kullanılan aynı delikten iğne takın. Güvenli iğne kalp hemostat kelepçe yerleştirin. </li><li> Döküm ajan çözümü yaklaşık 3 ml / dk yavaş yavaş sol ventrikül içine enjekte edilir. Aşırı basınç döküm ajan veya potansiyel damar rüptürü yanlış akışına neden olabilir. </li><li> Dahil olmak üzere başarılı bir perfüzyon belirtilerini arayın: döküm görselleştirilmesibağırsak ve karaciğer damarsal, distal ekstremite renk değişikliği, ve burun ve dilde renk değişikliği ing ajan. Gerekli uygun perfüzyon ulaşmak için iğne yeniden ayarlayın. </li></ol> 3. Doku Toplama ve İşleme <ol><li> % 4 paraformaldehid beyin ve yer çıkarın gece 4 ° C </li><li> % 25 EtOH, 1 gün,% 50 EtOH, 1 gün,% 75 EtOH, 1 gün,% 95 EtOH, 2 gün ve% 100 EtOH, 2 gün oda sıcaklığında giderek konsantre EtOH içine doğrudan paraformaldehid koyarak beyin dehydrate: . </li><li> 2 gün boyunca oda sıcaklığında metil salisilat perfüze beyin çeker, kan damarlarının çevresindeki beyin dokusu netleştirin. </li><li> Bütün unsectioned açıklık beyin damarları, beyin, diseksiyon mikroskobu (Şekil 1) (Leica MZFL III mikroskop, Leica Microsystems, Bannockburn, IL) veya aydınlık alan mikroskobu (Şekil 2) (Leica DM / altında metil salisilat içine ile görüntülenmiş olabilir LS, Leica Microsystems). </li><li> Reclarificationdoku tamamen temizlenir değilse yapılabilir. Metil salisilat, transfer beyin itibaren 2 gün boyunca% 95 EtOH, 2 gün boyunca% 100 EtOH ve 2 gün boyunca metil salisilat. </li></ol> 4. Micro-CT Görüntüleme veya histolojik Uygulama Doku Hazırlama <ol><li> Beyin doğrudan (Şekil 4) açıklama sonra veya yeniden hidrasyon sonra mikro-BT ile görüntülenebilir. </li><li> Beyin dokusu histolojik analiz için hazırlamak için, seri seyreltilmiş EtOH ile beyin rehidrate% 95 EtOH, 1 gün;% 75 EtOH, 1 gün,% 50 EtOH, 2 gün,% 25 EtOH, 2 gün% 100 EtOH, 1 gün: PBS içinde saklayın. Beyin, daha sonra standart bir prosedür kullanılarak parafine gömülü olabilir. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar Vasküler döküm cerebrovasculature makroskobik beyin yüzeyi (Fig.1A) görülebilir. Parankim içinde damar ağacı (Şekil 1B) görüntülenmiştir aşağıdaki açıklama olabilir. Detaylı bir damar yapısıgörüntülü ve kapsamı diseksiyon (Şekil 3) ve mikro-BT (Şekil 4), bir aydınlık alan mikroskobu (Şekil 2) altında analiz edilebilir. Aydınlık alan mikroskobu kullanarak, damar, yüksek büyütme (Şekil 2B) (Şekil 2A) beynin yanı sıra bireysel mikrodamarlar kesit farklı odak uçakları görülebilir. Diseksiyon kapsamında, bir cerebrovasculature üç boyutlu yapısı (Şekil 3) daha iyi görselleştirme izin, tek bir odak düzlemli tüm vasküler yapı görebilirsiniz. Büyük damar morfolojisi ve tüm beynin damarsal bir diseksiyon mikroskobu altında çekilen görüntüler gösterir, ancak aydınlık alan mikroskobu (Şekil 2B) ile çekilen fotoğrafları gösterilen detayları eksikliği olabilir. Bu teknik bize deneysel BAVM yetişkin fare modelinde 2 düzensiz damarları tespit etmek için izin verdi. Şekil 5 mikro-BT (Şekil 5A) ve aydınlık alan mikroskobu (Şekil 5B) tarafından tespit edilen aynı düzensiz damarlarının bir örnek gösterir. Hep birlikte, bu veriler t analiz olduğunu gösterirvasküler attıktan sonra çoklu görüntüleme araçları ile aynı örnek. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/2958/2958fig1.jpg"> Şekil 1. Tüm fare beyin damar döküm. Önce (A) ve (B) solvent metil salisilat açıklama sonra. Gemileri beyin yüzeyinin (A) ve parankim aşağıdaki açıklama prosedürü (B) açıkça görüntülenmiştir. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/2958/2958fig2.jpg"> Şekil 2 açıklık vasküler döküm beyin aydınlık mikroskop görüntüleri. Beyin, çeşitli uçaklar ve farklı büyütme seviyelerinde görüntülü olabilir. Ölçek Bar 200μm (A) ve (B) 50μm. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/2958/2958fig3.jpg"> Şekil 3 dorsal görünümü gösteren tüm yetişkin fare beyin cerebrovasculature 1x mikroskopta görüntü Diseksiyon. &lt;img alt = "Şekil 4" src = "/ files/ftp_upload/2958/2958fig4.jpg" /&gt; Şekil 4 Micro-CT dorsal görünümü Şekil 3'te gösterilen tüm yetişkin fare beyin tarama görüntü. <img alt="Şekil 5" src="/files/ftp_upload/2958/2958fig5.jpg"> Şekil 5 beyin arteriovenöz malformasyon tespit etmek için vasküler döküm yöntemi uygulanması. A) beyin damar döküm Micro-CT taraması ventral bir görünümden sağ hemisfer genişletilmiş, düzensiz AVM gibi gemiler bölge gösterir. Bölge büyütülmüş görüntü (beyaz kutu), sağ tarafta gösterilmiştir. B) Aynı düzensiz damarlar 50x büyütme aydınlık mikroskop altında görüntülendi. Ölçek çubuğu 50 mm.

<ol><li>Bolland, B. J., Kanczler, J. M., Dunlop, D. G., Oreffo, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+in+vivo+muCT+evaluation+of+neovascularisation+in+tissue+engineered+bone+constructs%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Development of in vivo muCT evaluation of neovascularisation in tissue engineered bone constructs.</a> Bone. 43, 195-202 (2008).</li>
<li>Walker, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arteriovenous+malformation+in+the+adult+mouse+brain+resembling+the+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Arteriovenous malformation in the adult mouse brain resembling the human disease.</a> Ann. Neurol. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Iqbal, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+analysis+of+novel+mono-+and+multivalent+VHH-fragments+and+their+application+for+molecular+imaging+of+brain+tumours%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Kinetic analysis of novel mono- and multivalent VHH-fragments and their application for molecular imaging of brain tumours.</a> Br. J. Pharmacol. 160, 1016-1028 (2010).</li>
<li>Fukunaga, A., Kawase, T., Uchida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+recovery+after+simultaneous+transplantation+with+neuro-epithelial+stem+cells+and+adjacent+mesenchymal+tissues+into+infarcted+rat%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Functional recovery after simultaneous transplantation with neuro-epithelial stem cells and adjacent mesenchymal tissues into infarcted rat.</a> 145, 473-480 (2003).</li>
<li>Chugh, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+cerebral+blood+volume+in+mouse+brain+regions+using+micro-computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">Measurement of cerebral blood volume in mouse brain regions using micro-computed tomography.</a> Neuroimage. 47, 1312-1318 (2009).</li>
<li>Marxen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroCT+scanner+performance+and+considerations+for+vascular+specimen+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Phys%22%5BJournal%5D)">MicroCT scanner performance and considerations for vascular specimen imaging.</a> Med. Phys. 31, 305-313 (2004).</li>
<li>Barger, A. C., Beeuwkes, R., 3rd, L. ainey, L, L., Silverman, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothesis%3A+vasa+vasorum+and+neovascularization+of+human+coronary+arteries.+A+possible+role+in+the+pathophysiology+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Hypothesis: vasa vasorum and neovascularization of human coronary arteries. A possible role in the pathophysiology of atherosclerosis.</a> N. Engl. J. Med. 310, 175-177 (1984).</li>
<li>Fossett, D. T., Caputy, A. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFossett%2C+DT+%22Operative+Neurosurgical+Anatomy%22">Operative Neurosurgical Anatomy</a>. , Thieme Medical Publishers. New York. (2002).</li>
<li>Reynolds, D. G., Brim, J., Sheehy, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vascular+architecture+of+the+small+intestinal+mucosa+of+the+monkey+%28Macaca+mulatta%29%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec%22%5BJournal%5D)">The vascular architecture of the small intestinal mucosa of the monkey (Macaca mulatta).</a> Anat. Rec. 159, 211-218 (1967).</li>
<li>Bernard, S., Luchtel, D. L., Polissar, N., Hlastala, M. P., Lakshminarayan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+size+of+bronchopulmonary+anastomoses+in+sheep+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec.+A.+Discov.+Mol.+Cell.+Evol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Structure and size of bronchopulmonary anastomoses in sheep lung.</a> Anat. Rec. A. Discov. Mol. Cell. Evol. Biol. 286, 804-813 (2005).</li>
<li>Brady, J. M., Cutright, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+technique+of+measuring+blood+vessel+volume+in+bone+applied+to+the+mandible+and+humerus+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec%22%5BJournal%5D)">A new technique of measuring blood vessel volume in bone applied to the mandible and humerus of the rat.</a> Anat. Rec. 170, 143-146 (1971).</li>
<li>Evan, A. P., Dail, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efferent+arterioles+in+the+cortex+of+the+rat+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec%22%5BJournal%5D)">Efferent arterioles in the cortex of the rat kidney.</a> Anat. Rec. 187, 135-145 (1977).</li>
<li>Murphy, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+Notch4+signaling+induces+hallmarks+of+brain+arteriovenous+malformations+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Endothelial Notch4 signaling induces hallmarks of brain arteriovenous malformations in mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105, 10901-10906 (2008).</li>
</ol>

Laboratuar hayvanlarının kullanıldığı için deneysel prosedürler, University of California, San Francisco (UCSF) Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından kabul edildi.

Biz burada çeşitli yöntemleri ile görüntülü olabilir yetişkin fare cerebrovasculature döküm için bir yöntem raporu. Bu yöntemin hastalık modeli BAVM Uygulama düzensiz damarlarının 3 boyutlu analiz sağlar. Potansiyel gelecek çalışmalar, mikro-BT görüntüleri nicelik, histolojik analiz, doku ve damar hastalığı ilerlemesi tanısı içerir. Ortak Sorunlar ve Öneriler Karşılaşılan Beynin damarsal Komple perfüzyon her zaman elde değil. Sol atrium veya aort çatlaması olmaksızın distal kan damarları ulaşmak için yeterli basınç olması bir sorundur. Bunu aşmak için, yaklaşık 100mmHg tutarlı bir basınç uygulayın. Ayrıca, aort içine ajan döküm uygun çıkış sağlamak için iğne pozisyonu ayarlayın. Döküm ajan beyin damarlarının ulaşabilirsiniz karotis arterler sınırlı değildir ki önemlidir. Kritik işlemler için geliştirilmiş küçük bir gemi ile ilişkilifüzyon (1): damar kan uygun takas döküm ajan (2) filtrasyon; ve (3) ajan enjeksiyon döküm sırasında iğne yerleştirilmesi. Bakım, sol atrium ve akciğer içine ajan döküm enjeksiyon önlemek için alınmalıdır. Diğer araştırmacılar başarıyla ek prosedürleri kullanarak 3 olmadan fare ve sıçan 4 cerebrovasculature perfüze var. Hemotoxylin% 93 damar lümeni perfüzyon 5 gösterdi Microfil perfüze gemilerin Manuel analiz zıt. Daima atmayın veya hızlı polimerize ve araçlar çok konular için kullanılamaz olarak döküm maddesi ile temas gelen herhangi bir araç tamamen temiz. Çevresindeki fare beyin dokusu netleştirilmesi zor olabilir. Metil salisilat batırıldıktan sonra, doku, damar görüntüleme zorlaştırır opak görünebilir. Uygun dehidratasyon ve açıklama sağlanması, bu sorunu çözmek gerekir. Bir rocker beyin dokusunun yerleştirilmesi sırasında alkol ve metil salicylate tedavi doku açıklama artırabilir. Tekniğin dezavantajları Bu tekniğin sınırlamalar şunlardır: (1) katalizör ilave edildikten sonra hızlı bir şekilde kalınlaşmasına olarak karıştırılarak hemen sonra döküm ajan çözüm enjekte etmek için gerekli olan, (2) döküm aracı kolayca büyük iletkenlik damarları doldurur, ama değil mi arteriol (direnç damarları) ve kılcal (besleyici damarlar) gibi güvenilir küçük gemilere, dolgu ve bazı gruplar mikro-CT görüntüleme 1,6 Microfil tercih rağmen (3), mikro-BT görüntüleme için en iyi radyoopak kontrast değildir. Ancak, uygun iğne yerleştirilmesi, geminin konumu ve perfüzyon basıncı da dahil olmak üzere yukarıda önerilen önerileri aşağıdaki, küçük damarları tam bir döküm elde edilebilir. Çeşitli analiz araçları çeşitli adaptasyon, bu ajan, arteriyel ve venöz dolaşım da dahil olmak üzere, serebrovasküler yapısını analiz etmek için değerli bir araç yaparperspektifler. Tekniğin Uygulamaları Bu yöntemin avantajı, geniş bir uygulama potansiyeli. Döküm, arterler, venler, bünyesinde tüm doku kılcal damarları dahil tüm damarları, dolgular, çeşitli türler birden fazla organların vasküler yapıları analiz edilebilir. Daha önceleri, diğer grup insan, maymun 9, 10 koyun, sıçan 4,11,12, fare 3,13 8 7 büyük ve küçük gemiler için bu perfüzyon kullanmışlardır. Biz şimdi, hem de sağlıklı ve hastalıklı devletlerin, fare beyin mikrodamarlar yapısını analiz 2 bu tekniği kullanarak kanıt gösteriyor . Buna ek olarak, çeşitli organlarda gemilerin görselleştirme artırmak için farklı boyutlarda ve farklı renkler gemileri serpmek için çeşitli viskozite Microfil çözümleri vardır. Örneğin, kırmızı ile tezat soluk beyin parankimi kolayca görüntülenebilmekte ve sarı olabilirkoyu kırmızı miyokardın. Ayrıca, malzeme radyoopak olduğu gibi, damarlar mikro-CT 3D dönebilen bir görüntü elde etmek için tarama görüntülü olabilir. Dokusu aynı zamanda görüntülü edildikten sonra parafin bölümleri ve histolojik analiz için kullanılabilir. Sonuç Damar, cerebrovasculature morfolojik yapısını incelemek için bir dizi analiz teknikleri kullanarak adapte edilebilir yetişkin fare beyin, kan damarları, bir döküm yapmak için buraya bir protokol göstermektedir. Ayrıca, düzensiz şekilli genişlemiş damarlar tarafından temsil edilen, BAVM hastalık durumu bir model, bu yöntemin uygulanması için kanıt sağladı venöz dolaşım için arteriyel kan şant. Çeşitli vasküler döküm yöntemleri vardır. Bir damar döküm için buraya sağlayan basit bir protokoldür, çeşitli görüntüleme yöntemleri kullanılarak yetişkin fare beynin damarsal incelemek için bir araç olarak kullanılıyor olabilir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Notlar </td></tr><tr><td> Microfil </td><td> FlowTech, Inc. </td><td> MV130 </td><td> 4 ay raf ömrü </td></tr><tr><td> Metil salisilat </td><td> Fisher Scientific </td><td> O3695-500 </td><td> doku açıklığa kavuşturmak için </td></tr></tbody></table>

3d görüntüleme ve morfolojik analizi yetişkin mouse serebrovasküler döküm

Cerebrovascular Casting of the Adult Mouse for 3D Imaging and Morphological Analysis

Vasküler görüntüleme, serebrovasküler hastalıklar, beyin arteriovenöz malformasyonlar (BAVMs) klinik tanı ve tedavisinde çok önemlidir. Hayvan modelleri, serebrovasküler hastalıklar etiyopatogenezinin multi ve potansiyel tedaviler eğitimi için gerekli olan. Görüntüleme büyük hayvanlarda damar nispeten kolaydır. Ancak, damar görüntüleme yöntemleri fare beyin hastalığı modelleri gelişmekte olan genetiği değiştirilmiş fare hatlarının maliyeti ve yer durumu nedeniyle arzu edilen bir durumdur. Görüntüleme fare serebral vasküler ağacın bir sorundur. Insanlar ve büyük hayvanlar, makrovasküler angioarchitecture değerlendirilmesi için altın standart (iletkenlik) x-ray kontrast tabanlı kateter anjiyografi, küçük kemirgenler için uygun bir yöntem değil. Bu makalede, birçok d kullanarak, analiz edilebilir arterler, venler ve kılcal damarlar dahil olmak üzere, tüm vasküler yatağın dayanıklı bir iskelet oluşturur, serebrovasküler döküm bir yöntem mevcutifferent yöntemleri. Fare cerebrovasculature mikrodamarlar komple döküm zor olabilir, ancak bu zorlukları, adım-adım, bu protokolde ele alınmaktadır. Vasküler döküm malzeme Intracardial perfüzyon sayesinde, vücuttaki tüm damarları döküm. Beyin sonra kaldırılır ve organik solvent metil salisilat kullanılarak açıklık olabilir. Beyin kan damarlarının üç boyutlu görüntüleme, herhangi bir konvansiyonel aydınlık mikroskop ya da diseksiyon mikroskobu ile basit ve masrafsız bir görüntülenebilmekte. Döküm cerebrovasculature aynı zamanda görüntülü ve mikro bilgisayarlı tomografi (mikro-CT) 1 kullanılarak sayısal olabilir. Buna ek olarak, görüntülü edildikten sonra, döküm beynin histolojik analiz için parafine gömülü olabilir. Diğer tekniklerle karşılaştırıldığında bu damar döküm yöntemi yararı aydınlık mikroskopik analizi de dahil olmak üzere, çeşitli analitik araçlar, geniş bir adaptasyon, CT nedeniyle radyoopak karakteristik taramamalzemenin yanı sıra, histolojik ve immünohistokimyasal analiz teristic. Bu doku etkin kullanımı, hayvan kullanımını kaydetmek ve maliyetleri azaltabilir. Biz son zamanlarda düzensiz kan damarlarını mikroskobik seviye 2 yetişkin BAVM bir fare modeli görselleştirmek, ve mikro-CT taraması görüntülü biçimlendirilmiş damarların ilave bir resim sağlamak için bu yöntemi uygulaması göstermiştir . Bu yöntemin dezavantajı var ve her türlü analiz için ideal olmamasına rağmen, kolay öğrenilen ve vücutta yaygın kan damarlarının damar döküm uygulanan bir basit, pratik bir tekniktir.

Bu makalede, biz gerçekleştirmek için kolay ve görüntü yetişkin fare beyin damar ağacı kullanılabilir serebrovasküler döküm için basit ve pratik bir tekniği mevcut.

3D Görüntüleme ve Morfolojik Analizi Yetişkin Mouse Serebrovasküler Döküm

Vasküler görüntüleme, beyin arteriyovenöz malformasyonlar (BAVM'ler) gibi serebrovasküler hastalıkların klinik tanısında ve yönetiminde kritik öneme sahiptir.

Bu prosedürün genel amacı, yetişkin farenin serebral damar sistemini 3D olarak görselleştirmektir. Bu işlem, önce göğüs boşluğunun açılması ve ardından heparinli PBS ile intraoral perfüzyon yapılarak damar sistemindeki tüm kanın temizlenmesiyle gerçekleştirilir. Perfüzyonun ardından, tüm dolaşım sistemini perfüze etmek için sol ventriküle döküm ajanı enjekte edilir. Perfüze edilen beyin daha sonra çıkarılır ve paraformaldehit ile fikse edilir.Prosedürün son adımı, beyin dokusunu etanol ve metil salisilat ile dehidre etmek ve şeffaflaştırmaktır. Nihayetinde, vasküler ağacı aydınlık alan veya diseksiyon mikroskobu altında ve mikro CT taramasıyla görüntülenebilen şeffaf bir fare beyni sonuçları elde edilebilir. Merhaba, ben California Üniversitesi San Francisco'dan Spen Walker.Bugün yetişkin fare beyninin vasküler dökümünü gerçekleştireceğiz. Bu tekniğin anjiyografi gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajları, fare gibi küçük hayvanlara uygulanabilmesi, radyoaktif materyal gerektirmemesi ve gerçekleştirilmesinin nispeten basit bir prosedür olmasıdır.Malzemenin radyopak özelliği sayesinde parlak alan mikroskopik analiz, CT tarama gibi çeşitli analitik araçların yanı sıra histolojik ve immünohistokimyasal analizlerin uygulanmasına imkan sağlamıştır. Tamam, başlayalım. Fareyi, salin içinde seyreltilmiş ketamin ve ksilazinle intraperitonal enjeksiyon yaparak anesteziye alın ve pati sıkıştırma testiyle tam anestezinin gerçekleştiğini doğrulayın.Anestezi onaylandıktan sonra, ksifoid çıkıntının hemen altından göğüs boyunca bir insizyon yapmak için makas kullanın. Ardından, diyaframı kesin ve daha sonra kaburga kafesinin dorsal ve ventral segmentleri arasından yukarıya doğru kesin. Torasik kaviteyi açığa çıkarmak için sternumu ve bitişik göğüs duvarını yukarı doğru katlayın ve perikardiyal keseyi açığa çıkarmak için bunları bir hemostat kullanarak sabitleyin.Ardından, kalbi açığa çıkarmak için gerekirse perikard kesesini cımbızla açın. Perfüzyon pompası 100 mmHg değerine ayarlanmışken, 37 °C'ye ısıtılmış, mililitre başına beş ünite heparin içeren PBS ile perfüzyona başlayın. Pompa çıkışına bağlı olan küt uçlu 22 gauge iğneyi, kalbin apeksine yakın sol ventriküle yerleştirin. Derhal kesin.Sistemik kan çıkışını sağlamak için sağ atriyumu açın ve kan dolaşımdan tamamen uzaklaşana kadar yıkamaya devam edin. İlk olarak, beş mililitre seyrelticiyi dört mililitre filtrelenmiş bileşik ile karıştırarak bir döküm maddesi çözeltisi hazırlayın. Ardından, 450 µL kürleme maddesi ekleyin ve döküm maddesi çözeltisini 20 dakika içinde kullandığınızdan emin olun.Döküm maddesi çözeltisini kullanmadan hemen önce karıştırın. Uygun viskoziteyi sağlamak için, döküm maddesi çözeltisini 10 mililitrelik bir şırıngaya çekin. Şırıngaya 20 gauge uçlu bir küt iğne takın ve iğneyi çözeltiyle doldurun.İğneyi, kanı boşaltmak için kullanılan aynı delikten sol ventriküle yerleştirin ve ardından iğneyi bir hemostat klempi ile sabitleyin; aşırı basınç, enjeksiyon sırasında hatalı akışa veya potansiyel damar yırtılmasına yol açabileceğinden, döküm ajanı çözeltisini sol ventriküle manuel olarak yaklaşık dakikada üç mililitre hızla yavaşça enjekte edin. Döküm ajanının bağırsak ve karaciğer damarlarında görülmesi, distal ekstremite renk değişimi ile burun ve dil renk değişimi dahil olmak üzere başarılı perfüzyon belirtilerini takip edin. Uygun perfüzyonu sağlamak için gerekirse iğneyi yeniden ayarlayın.Beyni çıkarın ve dört santigrat derecede gece boyunca %4 paraformaldehit içerisinde bekletin. Ardından, ilk gün %25 etanol ile başlayarak, beyni oda sıcaklığında giderek artan konsantrasyonlardaki etanole yerleştirerek yedi gün boyunca dehidre edin. Beyin dehidre edildikten sonra, perfüze edilmiş beyni oda sıcaklığında iki gün boyunca metil salisilat içerisinde bekleterek kan damarları etrafındaki beyin dokusunu şeffaflaştırın; iki günün ardından, şeffaflaştırılmış tüm beynin vaskülaritesi, metil salisilat içerisinde bekletilerek, kesit alınmadan aydınlık alan mikroskobu, dissection mikroskobu veya mikro CT taraması ile görselleştirilebilir. Aydınlık alan mikroskobu kullanılarak, beyne kesit alınmadan farklı odak düzlemlerindeki vaskülarite ile yüksek büyütmede tekil mikrovasküler yapılar incelenebilir.Alt panelde gösterilmiştir. Bir diseksiyon mikroskobu altında, tüm serebral vasküler yapı tek bir odak düzleminde görülebilir, bu da üç boyutlu yapısının daha iyi görselleştirilmesine olanak tanır. Bu görüntü, büyük damar morfolojisini ve tüm beyin vaskülaritesini göstermektedir, ancak brightfield mikroskobuyla çekilen resimlerdeki detaylardan yoksundur.Mikro CT tarama, damar sisteminin 3D görselleştirilmesine ve döndürülebilir 3D modellerin oluşturulmasına olanak tanır. Damar sistemini görselleştirmek için burada, aynı vasküler malformasyonun parlak alan mikroskobu görüntüsüyle ilişkilendirilmiş, mikro CT ile tespit edilen anormal bir serebral vasküler yapı gösterilmiştir. Birlikte, bu veriler aynı örneğin vasküler döküm sonrası birden fazla görüntüleme aracı kullanılarak analiz edilebileceğini göstermektedir.Bu videoyu izledikten sonra, microfill solüsyonu kullanarak yetişkin fare beyninin kan damarlarının nasıl dökümü yapılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Bu prosedür; kanın damar sisteminden temizlenmesini, microfill solüsyonunun intraventriküler enjeksiyonunu, yetişkin fare beyninin toplanmasını ve işlenmesini ve serebrovasküler sistemin brightfield mikroskobu kullanılarak görüntülenmesini içerir. Bu prosedürün genel amacı, yetişkin fare beyninin vasküler yapısını üç boyutlu olarak görüntülemektir.

cerebrovascular-casting-adult-mouse-for-3d-imaging-morphological

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz milimetre yayılan ve beyin iltihabı olmadan ay dayanır farenin kafatasında bir görüntüleme penceresi oluşturmak için bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem de iki foton mikroskopi kullanılarak kan akımı, hücresel dinamiği ve hücre / vasküler yapının uzunlamasına çalışmalar için uygundur.

Fare Beyin Uzun vadeli Görüntüleme için Parlak ve Takviyeli inceltilmiş-kafatası Pencere

Bu video, beynin farklı bölgelerine stabil optik erişim için bir fare modeline kraniyal pencere implante etmek için cerrahi bir prosedür sunmaktadır.

Fare Modelinde Kranial Görüntüleme Penceresinin İmplantasyonu: Murin Beyninin Bölgelerine Stabil Optik Erişim için Cam Tabanlı Lamel İmplante Etmek İçin Cerrahi Bir Prosedür

Kaynak: Choi, J. P.  ve diğerleri.  Fare Modelinde Serebral Kavernöz Malformasyonların İndüksiyonu ve Mikro-BT Görüntülemesi. J. Vis. Uzm.  ( 2017)Bu video, bir fare beynindeki serebral kavernöz malformasyon (CCM) lezyonlarını görselleştirmek için mikro-BT görüntülemenin kullanımını göstermektedir. Beyin dokusundaki CCM lezyonlarının yoğunluğunu ve yerini değerlendirmek için numune hazırlama, görüntüleme ve 3D görüntü rekonstrüksiyonu adımlarını detaylandırır.

Bir Fare Beyninde Serebral Kavernöz Malformasyon Lezyonlarının Kontrastlı Mikro-BT Görüntülemesi

MRI taramaları (insan), 3D görüntüleme yazılımı ve immünohistolojik analiz kullanarak, beynin lateral ventriküllerindeki değişiklikleri belgeliyoruz. Lateral ventrikül hacim değişikliklerinin uzunlamasına 3D haritalanması ve yaşlanma veya hastalık nedeniyle insan beyninde meydana gelen periventriküler hücresel değişikliklerin karakterizasyonu daha sonra farelerde modellenir.

İnsanlar ve Mouse Periventriküler Doku Yanal ventrikülleri ve histolojik Karakterizasyonu 3D Modelleme

Farklı açılardan kullanarak fare yavru beyin kesmek için, biz büyük işitme orta beyin ve ön beyin yapılarının çoğu arasındaki bağlantıları yakalar önceden açıklanan akut beyin dilim üzerine geliştirmek.

Bir Colliculo-talamokortikal Fare Beyin Dilim modifikasyonu, 3-D Odası Bileşenleri baskı ve Multi-ölçekli Optik Görüntüleme birleştirilerek

Bu yazının uzunlamasına iki foton mikroskopi kullanılarak in vivo amiloid plak birikimi sırasında cerebrovasculature bir biçimlenme izlemek için bir yordam açıklanır. Incelmiş kafatası preparat, Alzheimer hastalığının bir fare modelinde serebrovasküler hasara ilerlemesini değerlendirmek için floresan boyalar görselleştirme sağlar.

uzunlamasına<em&gt; İn Vivo</em&gt; Cerebrovasculature Görüntüleme: MSS Hastalıkları uygunluk

Bu iletişim kuralı bir fare modeli hastalığında serebral derin malformasyon indüksiyon gösterir ve kullanır kontrast mikro bilgisayarlı tomografi lezyon yük ölçmek için geliştirilmiş. Bu yöntem moleküler temelini ve serebral derin malformasyon için potansiyel tedaviler ve diğer serebrovasküler hastalıklar çalışmaya kurulan fare modelleri değerini artırır.

İndüksiyon ve fare modeli serebral derin malformasyon mikro-CT görüntüleme

Bu tekniğin amacı, erken postnatal ve erişkin farelerin pulmoner arter ağlarının akciğer şişmesi yoluyla ex vivo görselleştirilmesi ve pulmoner arter yoluyla radyoopak polimer bazlı bileşiğin enjeksiyonudur. Döküm dokular için potansiyel uygulamalar da tartışılmıştır.

Mikro-BT Görüntüleme için Erişkin ve Erken Postnatal Fare Akciğerlerinin Vasküler Döküm

Bu çalışma, mikro-bilgisayarlı tomografi (mikro-BT) ve ex vivo örneklerde bir kontrast maddeyi birleştirerek yenidoğan fare beyinlerinin yüksek çözünürlüklü görüntülerini elde etme adımlarını açıklamaktadır. Bu görüntülerde beyin boyutunu ve şeklini ölçmek için temel morfometrik analizleri açıklıyoruz.

Fare Yenidoğan Beyinlerinin Mikro-BT Görüntüleme ve Morfometrik Analizi

Asimetrik bilateral ortak karotis arter stenozunun iğne yöntemi, vasküler kognitif bozukluk ve demans için bir fare modeli oluşturmak için önerilmiştir. Daha önce kurulmuş modellere kıyasla daha uzun vadeli sonuçlarla sonuçlanır ve canlı MRG ile uyumludur. Prosedürü gösteren görsel temsil, ameliyatta ustalaşmak için rehberlik sağlar.

İğne Kılavuzluğunda Asimetrik Bilateral Ortak Karotis Arter Darlığına Dayalı Vasküler Kognitif Bozukluk ve Demans için Bir Fare Modeli

İntravital mikroskopi, doku rejenerasyonu ve tümör gelişimi gibi dinamik biyolojik süreçlerin incelenmesine izin verir. Oldukça dinamik bir doku olan kalvarial kemik iliği, hematopoez ve vasküler fonksiyon hakkında bilgi verir. Biyouyumlu bir 3D baskılı kafa sabitleme implantı kullanmak, tekrarlayan uzunlamasına görüntülemeye olanak tanıyarak doku dinamikleri ve tümör mikro çevresi hakkındaki anlayışımızı geliştirir.

Kalvarial Kemik İliğinde Vasküler Dinamiklerin İntravital Longitudinal Görüntülenmesi

Keşfedin, yetişkin fare beynindeki serebrovasküler yapıları 3D görüntülemek için döküm tekniğini. Bu yöntem, damarsal ağaçları şeffaf beyin dokusunda detaylı incelemeye olanak tanır.

3D Görüntüleme ve Morfolojik Analizi Yetişkin Mouse Serebrovasküler Döküm

Daha fazla video keşfet