JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:47 dk. • July 8th, 2025
Ölümsüzleştirilmiş bir hematopoietik kök ve progenitör hücre olan iHSPC, spesifik steroid hormonu ve hematopoietik sitokin içeren ortamda kültür ile başlayın ve farklılaşmamış bir durumda hücre proliferasyonunu düzenleyin. Uygun bir katyonik polimer ve lentiviral vektörler ekleyin.
Rekombinant virüsler, spesifik bir konakçı gene ve antibiyotik direnç belirteç genine yönlendirilmiş kısa firkete RNA'ları, shRNA'lar için kodlama dizileri taşır.
Tortu hücrelerine ve virüslere santrifüjleyin. İnkübasyon sırasında, katyonik polimerler hücresel zar yüklerini nötralize ederek viral bağlanmayı arttırır. Membran füzyonunu takiben, viral genetik materyal ve enzimler hücresel sitoplazmaya salınır. Viral genom ters kopyalanır, çekirdeğe hareket eder ve konakçı genomuna entegre olur.
Yapıdaki belirli bir promotörün etkisi altında, bir hedef mRNA eşleştirme dizisi, döngü segmenti ve birinciyi tamamlayan başka bir dizi içeren shRNA gen yapısı, eşleşmemiş nükleotidlerin döngü segmenti ile shRNA oluşturarak kopyalanır. Transkripsiyonu takiben, shRNA sitoplazmaya aktarılır.
Spesifik bir ribonükleaz, çift sarmallı RNA, siRNA oluşturan döngü segmentini böler. siRNA, RNA ile indüklenen susturma kompleks
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin