phiC31-İntegraz Aracılı Bölgeye Yönelik Transgen Entegrasyonu: Bir Anofel Vektörüne Bölgeye Özgü Transgen Entegrasyonu için Bir Mikroenjeksiyon Tekniği

phiC31 integraz, yabancı bir gen olan bir transgenin bir konakçı genomuna bölgeye özgü rekombinasyonunu katalize eden faj türevli bir rekombinaz enzimidir. Bir Anofel konakçısında transgen entegrasyonu için, uygun bir tamponda bir Anofel embriyosu ile başlayın.

Anofel genomu, gen entegrasyonu için bir bağlanma bölgesi ve görsel seçim için bir camgöbeği-floresan işaretleyici ile önceden tasarlanmıştır. Daha sonra, istenen transgen kargosunu, bir bağlantı yerini, bir kırmızı floresan işaretleyiciyi ve plazmit omurga bileşenlerini bir şişeye taşıyan küçük bir hacimde donör plazmidi ekleyin. Ardından, gen kodlayan bir integraz taşıyan bir yardımcı plazmitin optimum hacmini ekleyin. Şimdi, plazmit karışımını bir mikroşırıngaya yükleyin.

Plazmitleri, germ hücrelerinin köken yeri olan embriyonun arka kutbuna nazikçe enjekte edin, bu da sitoplazmanın hafif bir hareketine neden olur. Embriyonun içine girdikten sonra, yardımcı plazmit integraz enzimlerini sentezlemeye başlar.

İntegraz enzimi, donör plazmid ve konakçı genomu arasında bölgeye özgü rekombinasyona aracılık eder. Böylece, donör plazmidinden gelen transgen ve kırmızı floresan işaretleyici, Anofel genomundaki rekombinant bağlanma b