JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:12 dk. • July 8th, 2025
İlgilenilen geni çevreleyen LoxP bölgelerini (Cre-rekombinaz enzimleri tarafından tanınan spesifik diziler) barındıran değiştirilmiş bir genom içeren genetik olarak tasarlanmış bir fare modeliyle başlayın. Fare ayrıca organa özgü CreER rekombinazı kodlayan bir plazmit vektörü ile transfekte edilir ve bu da CreER rekombinaz eksprese eden elementin karaciğer hücrelerinin genomuna entegrasyonuna yol açar.
Cre rekombinaz ve östrojen reseptörü ER'nin mutant ligand bağlama alanını içeren aktif olmayan bir füzyon proteini olan eksprese edilen CreER rekombinazı, sitoplazmadaki ısı şoku proteini ile etkileşime girer ve bağlanır. Bu bağlanma, sitoplazmada CreER rekombinazı sınırlar.
Etanol ve uygun yağ kullanarak hidrofobik bir ilaç olan tamoksifen çözeltisi hazırlayın. Şimdi, karın organlarına zarar vermemek için tamoksifen solüsyonunu farenin karnının sol alt kadranına intraperitoneal olarak enjekte edin.
Enjekte edilen tamoksifen karaciğerde 4-hidroksitamoksifen, 4-OHT'ye metabolize edilir. Ayrıca, seçici bir östrojen reseptör modülatörü olan 4-OHT, CreER rekombinazının ER-ligand bağlanma alanına bağlanarak konformasyonel değişikliğine neden olur. Bu, ısı şoku proteininden CreER rekombina
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin