Hücre Dışı Vezikül Alım Testi: 3D Floresan Görüntüleme Tekniği Kullanarak Hücre Dışı Veziküllerin Hücresel Alımını Görselleştirmek ve Ölçmek İçin Bir Yöntem

Hücresel iletişimi kolaylaştırmak için, hücreler hücre dışı veziküller, EV'ler - bir lipit zarı ile çevrelenmiş nano boyutlu yapılar salgılar. EV'ler, alıcı hücrelere iletmek için makromoleküller ve metabolitler dahil olmak üzere çeşitli biyolojik yükler taşır.

Konfokal mikroskopi kullanarak hücreler tarafından EV alımını görselleştirmek için önce yeni izole edilmiş EV'leri alın. Bu EV'ler, daha sonra kolay görselleştirme için bir floresan probuna bağlı antikorlarla önceden etiketlenmiştir.

Yapışık bir alıcı hücre kültürüne yeterli hacimde floresan etiketli EV'ler ekleyin. İstenilen süre boyunca kuluçkaya yatırın. İnkübasyon sırasında, etiketli EV'lerin bir alt popülasyonu yüzeysel olarak hücre yüzeyine yapışırken, diğer EV'ler içselleştirilir.

Hücre sitoplazmasını etiketlemek için farklı bir floresan boya ekleyin, bu da içselleştirilmiş EV'leri alıcı hücreye yapışanlardan ayırt etmeye yardımcı olur. Hücreleri konfokal bir mikroskop altına yerleştirin ve z ekseni boyunca farklı odak düzlemlerinde görüntü elde edin, numune kalınlığı boyunca bir dizi optik bölüm elde edin.

Yüksek çözünürlüklü, üç boyutlu bir örnek görüntü oluşturmak için bu optik kesit koleksiyonunu (bir z-yığını) de