JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 4:04 dk. • July 8th, 2025
Uygun bir kültür ortamında tek katmanlı bir epitel hücresi tabakası ile başlayın. Bu hücreler integrinleri eksprese eder - zarı kapsayan yüzey reseptörleri. Kültür ortamı, bir glikoprotein olan epitel hücresi tarafından salgılanan fibronektin içerir.
Kültür plakasına gram pozitif patojenik bir bakteri olan Staphylococcus aureus'un bir süspansiyonunu ekleyin. Bu bakteriler, hücre duvarlarına sabitlenmiş fibronektin bağlayıcı proteinler veya FnBP'ler içerir.
Bakteriyel enfeksiyonu başlatmak için plakayı inkübe edin, burada fibronektin bakterinin FnBP'sine ve epitelyal konak hücreleri üzerindeki integrinlere bağlanır. Bu üçlü FnBP-fibronektin-integrin etkileşimi, konakçıda bakteri içselleşmesine aracılık eder.
Hücreleri bir endopeptidaz enzimi olan lizostafin ile tedavi edin ve inkübe edin. Lizostafin, hücre dışı bakterilerin hücre duvarlarına seçici olarak girer. Peptidoglikanlardaki pentaglisin köprülerini parçalar, böylece hücre içi bakteriler lizostafinden korunurken onları parçalar.
Kalan lizostafini etkisiz hale getirmek için kültürü proteolitik bir enzimle destekleyin ve adımlarda hücre içi bakterileri öldürmesini önleyin.
Kültüre, konakçı epitel hücrelerini parçalayan ve hücre
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin