JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:03 dk. • July 8th, 2025
Dokuda, çeşitli metabolik süreçler için çok önemli bir mineral olan demir, normalde hemoproteinlere ve hem olmayan demir proteinlerine bağlı olarak bulunur. Hemoproteinler, porfirin halkalarına bağlı demir veya hem demir içerirken, hem olmayan demir proteinleri porfirin halka yapısından yoksundur ve çoğunlukla ferrik veya hem olmayan demir içerir.
Fare karaciğer dokusundaki hem olmayan demir içeriğini tahmin etmek için, kurutulmuş, hasat edilmiş bir fare karaciğer dokusu parçasını düşük konsantrasyonlarda hidroklorik asit ve trikloroasetik asit ile tedavi edin. Dokuyu sindirmek ve asit kaynaklı protein çökelmesini kolaylaştırmak için yüksek sıcaklıklarda inkübe edin.
Düşük asit konsantrasyonları nedeniyle, hem olmayan demir, ilişkili proteinlerden salınır. Porfirin halkasına bağlı olan heme demiri etkilenmeden kalır.
Soğuduktan sonra, hem olmayan demir içeren istenen süpernatan hacmini çok kuyulu bir plakaya aktarın. Bir indirgeyici ajan olan tiyoglikolik asit ile desteklenmiş kromojenik demir şelatörü, batofenantrolin sülfonat, BPS'yi uygun tampona ekleyin ve inkübe edin.
Tiyoglikolik asit, tüm ferrik hem olmayan demiri, BPS'ye 1:3 oranında kolayca bağlanabilen ve oldukça kararlı,
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin