JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 4:46 dk. • July 8th, 2025
Osteoklastlar, çok çekirdekli makrofajlar, kemik rezorpsiyonunu kolaylaştırır - kemik dokusunun parçalanması ve kemik minerallerinin salınması.
Osteoklast rezorpsiyonunu in vitro olarak ölçmek için, osteoklast progenitör hücrelere farklılaşma ve bağlanma için ortam içeren makrofaj koloni uyarıcı faktör M-CSF'de insan periferik kan mononükleer hücrelerini kültürleyin. Osteoklast progenitörlerini ve santrifüjü hasat edin.
M-CSF ve nükleer faktör kappa-Β ligandının reseptör aktivatörü RANKL ile desteklenmiş ortamda yeniden süspansiyon halindeki süspansiyonu, inorganik kemik bileşenini taklit eden kalsiyum fosfat ile kaplanmış çok kuyulu plaka kuyucuklarına pipetleyin. M-CSF ve RANKL, osteoklast progenitör farklılaşmasına ve osteoklastlara füzyona neden olarak rezorpsiyonu aktive eder.
Aktive edilmiş osteoklastlar, kalsiyum fosfat kaplamaya yapışır, hücre iskeletlerini aktin açısından zengin bir sızdırmazlık bölgesi oluşturacak şekilde yeniden düzenler ve proton ve asit hidrolazları salgılayan fırfırlı sınırlar geliştirir. Elde edilen asidik ortam, kalsiyum fosfat kaplamasını çözerek kalsiyum ve fosfat iyonlarını serbest bırakır ve bir emilim çukuru oluşturur.
Kuluçka sonrası, çözünmüş
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin