Küresel Destekli Lipid Çift Tabakalı Deney: Mikroküreler Üzerinde Septin Düzeneğini Gözlemlemek İçin Bir Teknik

Septinler, kavisli plazma zarı yüzeylerine bağlanan anahtar hücre iskeleti proteinleridir.

Mikroküreler üzerinde in vitro septin düzeneğini gözlemlemek için, önce iki tabaka oluşumu için katı destek görevi gören düzgün boyutlu, mikroskobik silika boncukların bir süspansiyonunu alın. Herhangi bir boncuk kümesini kırmak için bu süspansiyonu girdaplayın.

Küçük unilamellar veziküller, SUV'lar - tek bir lipit çift tabakası ile çevrili küresel veziküller ile destekleyin. Mikro kürelerin çökelmesini önleyerek sürekli çalkalama ile inkübe edin.

İnkübasyon sırasında, dış kutup kafa grupları, SUV'ların hidrofilik mikroküre yüzeyine adsorpsiyonunu kolaylaştırır. Bu etkileşim, SUV'ların yırtılmasına neden olur, ardından SUV lipidlerinin sürekli bir tabaka olarak kavisli mikroküre yüzeyine füzyonu gerçekleşir ve bu da küresel, desteklenen bir lipid çift tabakası, SLB oluşumu ile sonuçlanır.

Fazla bağlanmamış lipidleri çıkarmak için yıkayın ve reaksiyon tamponunda yeniden süspanse edin. Spesifik olmayan adsorpsiyonları önlemek için küresel SLB süspansiyonunu polietilen glikol kaplı bir yüzeyin küçük bir bölgesine aktarın. Odaya floresan etiketli bir septin süspansiyonu ekleyin ve inkübe edin.

Se