Protein Faz Ayırma Deneyi: Zebra Balığı Larvalarının Spinal Motor Nöronlarında Mutant RNA Bağlayıcı Protein Faz Ayrımı İçin Optogenetik Bir Yöntem

Nükleer RNA bağlayıcı proteinler, RBP'ler, iyi tanımlanmış, üç boyutlu yapıya sahip sıralı bölgelerden ve daha az kararlı, içsel olarak düzensiz bölgelerden, IDR'lerden oluşan çok işlevli proteinlerdir.

Bazı nörodejeneratif hastalıklarda, IDR'ye özgü mutasyonlar, RBP'lerin sitoplazmada yanlış lokalize olmasına ve anormal bir şekilde zayıf etkileşimlere girmesine, dinamik, zarsız inklüzyonlar oluşturmasına neden olur - faz ayrılması adı verilen bir fenomen. Sonunda, bu inklüzyonlar toksik, çözünmeyen agregalara olgunlaşır ve bu da nöronal disfonksiyon ve dejenerasyon ile sonuçlanır.

Optogenetik kullanarak in vivo RBP faz ayrılmasını araştırmak için, uygun bir tamponda bir floresan raportöre ve mavi ışığa duyarlı bir fotoreseptör alanına kaynaşmış IDR mutasyona uğramış bir RBP'yi eksprese eden, anestezi uygulanmış, dekoryonlu bir transgenik zebra balığı larvası ile başlayın.

Daha sonra, omurilik görüntülemesi için larvaları erimiş bir agaroz damlasına yanal olarak monte edin. Larvaları hareketsiz hale getirerek agarozun katılaşmasına izin verin. Konfokal bir mikroskop kullanarak, nöronal çekirdekler içinde lokalize olan floresan RBP'leri görselleştirmek için omurilik görüntüleri elde