İn Vitro Mineralizasyon Deneyi: Alizarin Red S Boyama ve Ekstraksiyonu ile Kemik Grefti İkamesi Üzerindeki Osteoblast Kalsiyum Birikintilerini Ölçmek İçin Kolorimetrik Bir Yöntem

Kemik rejenerasyonu sırasında, osteoblastlar - kemik oluşturan hücreler - kırık bölgeye alınır, burada çoğalırlar ve bir kollajen matris olan osteoid salgılarlar. Bir olgunlaşma döneminden sonra, osteoblastlar, kalsiyum ve fosfat iyonlarının birikmesini düzenleyerek osteoidi mineralize eder ve yeni kemik sentezini başlatır.

Osteoblast mineralizasyonunun derecesini in vitro olarak ölçmek için, uygun ortamda birincil osteoblast süspansiyonu elde edin. Süspansiyonu, gözenekli kemik grefti ikame diskleri içeren çok kuyulu bir plakaya tohumlayın ve inkübe edin.

Diskler, hücre yapışmasına ve çoğalmasına izin veren bir iskele görevi görür.

Kullanılmış medyayı osteojenik takviyeler içeren taze medyayla değiştirin. Uzun süre kuluçkaya yatırın. Osteojenik takviyeler, osteoblastları kollajen matrisi üretmek ve ardından mineralize etmek için uyarır.

Fiksasyon sonrası, mineralize matrisi alizarin kırmızısı S, ARS, çözelti ile boyayın. Negatif yüklü bir boya olan ARS, matristeki pozitif yüklü kalsiyum iyonlarına bağlanarak kırmızı renkli bir kompleks oluşturur. Fazla lekeyi çıkarın. Osteoblast mineralizasyonunu düşündüren kırmızı kalsiyum birikintilerini tespit etmek için plakayı görüntüleyin.

A