JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 4:12 dk. • July 8th, 2025
Hücredeki yanlış katlanmış proteinlerin uzaklaştırılması, büyük ölçüde hücresel ubikitin-proteazom sistemi tarafından düzenlenir, burada protein ilk olarak küçük bir düzenleyici protein olan ubikitin tarafından tanınır ve etiketlenir ve hidroliz ve klerens için bir multiprotein kompleksi olan proteazoma gönderilir.
Nörodejeneratif hastalıklarda sık görülen bozulmuş ubikitin-proteozom sistem aktivitesi, yanlış katlanmış proteinlerin hücreler içinde birikmesine ve sitotoksik etkilere sahip çözünmeyen protein agregatları oluşturmasına neden olabilir.
Protein agregasyonunu in vitro olarak görselleştirmek ve ölçmek için, uygun ortamda, maruz kalan hidrofobik kalıntılarla yanlış katlanmış bir konformasyonu benimseyen floresan etiketli bir mutant proteini ifade eden, dönüştürülmüş memeli hücrelerinin bir süspansiyonunu elde edin.
Görüntüleme sırasında arka plan floresansını en aza indirmek için bir proteazom inhibitörünün artan konsantrasyonlarını siyah çok kuyulu bir plakanın kuyularına pipetleyin. Memeli hücre süspansiyonunu kuyucuklara tohumlayın. Hücrelerin plaka tabanına yapışmasını ve çoğalmasını sağlamak için inkübe edin.
İçeri girdikten sonra, proteazom inhibitörü proteazomun prot
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin