Jel-Pıhtı Limulus Amip Lizat Testi: Nanopartikül Formülasyonlarında Bakteriyel Endotoksin Tayini İçin Bir Yöntem
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 2:57 dk. • July 8th, 2025
Gram negatif bakterilerin dış zarı, lipopolisakkaritler veya LPS adı verilen endotoksinler içerir. LPS, bir hidrofilik oligosakkarit kısmına ve bir hidrofobik lipid A bölgesine sahiptir.
Konağın içine girdikten sonra, LPS bağlayıcı proteinler endotoksinleri tanır. Bu proteinler daha sonra dolaşımdaki bağışıklık hücreleri üzerindeki reseptörleri bağlar. Bu bağlanma, enflamatuar faktörleri serbest bırakan bağışıklık hücrelerini aktive eder. Bu faktörlerin aşırı üretimi, bağışıklık tepkisini abartarak hücre ölümüne neden olur.
Limulus Amiposit Lizatı veya LAL tahlili kullanarak endotoksinleri tespit etmek için, hidrofobik lipid A kısımları yoluyla nanopartiküllerin lipofilik yüzeyine bağlı endotoksinler içeren bir formülasyon alın.
Tüpe LAL reaktifi ekleyin. Bu reaktif, amebositlerden - at nalı yengeç kan hücrelerinden türetilen aktif olmayan enzimler ve proteinler içeren sulu bir lizattır.
Endotoksinlerin lizattan türetilmiş inaktif pıhtılaşma faktörü C proenzimine bağlanmasını kolaylaştırmak için tüpü inkübe edin ve otokatalitik olarak aktive edin.
Aktive edilmiş faktör C, başka bir proenzim olan faktör B'yi parçalayarak, bir pıhtılaşma enzimini parçalayan ve onu aktif bir forma dön
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin