Kromojenik Polimer Hidrojel Bazlı Enzim Tarama Testi: Sentetik Substratlar Kullanarak Karbonhidrat Aktif Enzimleri Taramak İçin Yüksek Verimli Bir Yöntem

0 görüntüleme3:49 dk • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Karbonhidrat parçalayıcı enzimler, karmaşık polisakkaritleri daha küçük oligosakkaritlere ayırır.

Enzim bozunma aktivitesini taramak için, polisakkaritlerin farklı renkli klorotriazin boyaları ile boyanmasıyla hazırlanan çoklu kromojenik polimer hidrojeller, CPH alarak başlayın. Her polisakkarit daha sonra enzimatik bozunma için sentetik bir substrat olan hidrojel oluşturmak üzere kimyasal olarak çapraz bağlanır.

Şimdi, farklı CPH substratlarını gözenekli bir reaksiyon plakasının farklı kuyucuklarına dağıtın. Bir aktivasyon çözeltisi ekleyin ve substratların optimum aktivasyonunu sağlamak için inkübe edin.

Tahlil plakasını boş bir ürün plakasının üzerine yerleştirin. Aktivasyon çözeltisinin reaksiyon plakasının gözeneklerinden verimli bir şekilde çıkarılmasını kolaylaştırmak için plakaları düşük bir hızda birlikte santrifüjleyin.

Daha sonra, reaksiyon plakasının tüm kuyucuklarını, enzimatik aktivite için optimal bir pH'ı koruyan uygun bir tamponda aynı tip karbonhidrat parçalayıcı enzim ile destekleyin. Plakayı kapatın ve enzimlerin polimerik ağa düzgün bir şekilde dağılmasına izin vermek için hafif çalkalama ile inkübe edin ve substrata erişmelerine izin verin.

İnkübasyon sırasında, substrata karşı uygun aktiviteye sahip enzim, daha küçük boyaya bağlı oligosakkaritler üretmek için CPH'deki polisakkaritleri bozar. Bu ürünler çözünürdür ve çözeltiyi renkli hale getirir. Renkli çözeltiyi ürün plakasına toplamak için plakaları döndürün.

Spektrofotometrik olarak, enzim aktivitesini ölçmek için ürün absorbansını belirleyin.

Başlamak için, her bir oyuğa 200 mikrolitre aktivasyon solüsyonu ekleyerek 96 oyuklu filtre tahlil kiti plakasını etkinleştirin. 10 dakika çalkalamadan oda sıcaklığında inkübe edin.

Mevcut aktivasyon çözeltisini döndürmek için bir santrifüj ve toplama için herhangi bir standart 96 oyuklu plaka kullanın. Kromojenik Polimer Hidrojel veya CPH substratlarına 100 mikrolitre steril su ekleyin ve stabilizatörü çıkarmak için bir vakum veya sıkma uygulayın. Yıkamayı iki kez daha tekrarlayın.

Enzim reaksiyonunu hazırlamak için, tahlil kiti plakasının her bir oyuğuna 150 mikrolitre 100 milimolar sodyum asetat tamponu pH 4.5 ve üç farklı konsantrasyonda 5 mikrolitre endo-selülaz çözeltisi ekleyin.

Çalkalama sırasında reaksiyon plakasından herhangi bir olası sızıntıyı toplamak için ürün plakasını test kiti plakasının altına yerleştirin. Ardından, tahlil kiti plakasını oda sıcaklığında 100 RPM'de yatay bir çalkalayıcıda 30 dakika inkübe edin.

Güvenilir veri elde etmek için, inkübasyon sırasında reaksiyon karışımını çalkalamak gerekir.

Tahlil kiti plakasını, ürün plakası altında olacak şekilde santrifüje yerleştirin ve reaksiyon ürününü ürün plakasının kuyucuklarına aktarmak için 10 dakika boyunca 2.700 x g'da döndürün.

Sıkma işleminden sonra, her bir kuyucuktaki sıvı hacminin yaklaşık olarak aynı olup olmadığını kontrol etmek için ürün plakasını görsel olarak inceleyin. Bir plaka okuyucu kullanarak, farklı yeşil CPH alt tabakaları için toplama plakasının 630 nanometredeki emiciliğini okuyun.

08:10

Çok enzim Yüksek verim Genetik Enzim Eleme Sisteminin Kullanılması Eleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

14:57

Sitosolion Glutatyon S-Transferazlarının Potansiyel Inhibitörleri için Spektrofotometrik Tarama

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:20

1-Cyano-4-Dimetilamiopyridine Tetrafluoroborate (CDAP) kullanılarak Çözünür Polisakkaritlerin Aktivasyonu ve Konjugasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:21

Yüksek Verimli Ekran Metagenomic Kütüphaneler selülaz Aktivitesi Biomining

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:16

Mantar Endoglucanase Faaliyet Yüksek Verimli Tarama Escherichia coli

İlgili videolar

0 Görüntüler

13:37

Biyomalzemelerin Yüksek Verimli Discovery için Polimer Mikroarray'ler

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:01

Genetik olarak Değiştirilmiş Bakteri Hücrelerinde Hedef Enzim İfadesinin Tespiti

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:27

Çözünmeyen Kromojenik Biyokütle Bazlı Enzim Taraması: Bitki Biyokütlesini Parçalayan Enzimlerin Bozunma Aktivitesini Değerlendirmek İçin Bir Test

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:02

Otomatik Modüler Yüksek Verimli Ekzopolisakkarit Tarama Platformu Oldukça hassas Karbonhidrat Parmak İzi Analizi ile birleştiğinde

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:51

Yeni çözünmez Kromojenik altyapı deneyiyle kitleri kullanılarak karbonhidrat parçalayıcı Enzimlerin yüksek verimli tarama

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026