Çözünmeyen Kromojenik Biyokütle Bazlı Enzim Taraması: Bitki Biyokütlesini Parçalayan Enzimlerin Bozunma Aktivitesini Değerlendirmek İçin Bir Test

Biyokütle, esas olarak karmaşık polisakkaritlerden oluşan bitki kaynaklı bir organik maddedir. Karbonhidrat parçalayıcı enzimler, daha küçük oligosakkaritler üretmek için bu polisakkaritler üzerinde hareket eder.

Bir enzimin bozunma aktivitesini değerlendirmek için, gözenekli bir reaksiyon plakasının kuyucuklarında bulunan farklı çözünmeyen kromojenik biyokütle - ICB substratları alarak başlayın. Bu substratlar, bitki türevli malzemelerin belirli bir renk klorotriazin boyası ile boyanmasından elde edilir. Elde edilen biyokütle, enzim aktivitesi için bir substrat görevi gören boya etiketli kompleks polisakkaritlere sahiptir.

Şimdi, karbonhidrat hidrolize edici enzim içeren bir tampon çözelti ekleyin. Tampon, optimum enzim aktivitesi için pH'ı korur. Reaksiyon plakasını bir çalkalayıcı üzerine yerleştirin ve inkübe edin. Sürekli çalkalama, enzim moleküllerinin ICB substratındaki hedef polisakkarite ulaşmasını sağlar.

İnkübasyon sırasında, hidrolize edici enzim, uzun zincirli polisakkaritler içindeki kovalent glikozidik bağları parçalar. Reaksiyon, çözelti içinde kalan boya moleküllerine bağlı çözünür oligosakkaritler üretir.

Bozunma tamamlandıktan sonra, reaksiyon plakasını bir ürün