Ek V Bağlanma Testi: Fosfatidilserin Etiketleme Yoluyla Apoptotik Eritrositleri Tanımlamak için Floresan Bazlı Bir Teknik
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 4:21 dk. • July 8th, 2025
Bazı patolojik durumlar sırasında, eritrositler veya kırmızı kan hücreleri, membran fosfolipidinin - fosfatidilserin - iç kısımdan dış zar broşürüne translokasyonu ile birlikte hücre büzülmesine uğrar, bu da programlanmış hücre ölümüne, eriptoza yol açar ve makrofaj aracılı hücre fagositozunu tetikler.
Annexin V bağlanma testi ile izole edilmiş insan eritrosit popülasyonunda iyonoforun neden olduğu eritozu ölçmek için, glikoz içermeyen bir tampon içinde süspanse edilmiş eritrositlerle başlayın.
Glikoz tükenmesi, daha sonra kalsiyum kanallarını aktive eden ve kalsiyum iyonu akışına neden olan sitozolik protein kinaz C'yi aktive ederek hücresel strese neden olur. Ayrıca, potasyum kanalları aktive edilerek potasyum akışına ve hücre büzülmesine neden olur.
Daha sonra, hücre dışı kalsiyum iyonları ile stabil bir kompleks oluşturan kalsiyum iyonofor ekleyin. Kompleks, kalsiyum iyonlarının hücre zarı boyunca sitozolik girişini kolaylaştırarak hücre içi kalsiyum konsantrasyonunu daha da artırır. Bu da, fosfatidilserinin iç hücre zarı broşüründen dış hücre zarı broşürüne translokasyonuna yardımcı olan, zar asimetrisini azaltan ve eriptozu indükleyen çift yönlü bir fosfolipid taşıyıcı olan s
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin