SMC Kasılmasının İn Vitro Olarak Ölçülmesi: Elektrik Hücresi-Substrat Empedans Algılama Kullanarak Düz Kas Hücrelerinin Kasılmasını Değerlendirmek İçin İnvaziv Olmayan Bir Yöntem

0 görüntüleme3:45 dk • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aort duvarı ağırlıklı olarak, aort kan akışını düzenlemek için kasılan ve gevşeyen kasılma protein makineleri içeren düz kas hücrelerine veya SMC'lere sahiptir.

Aort SMC'lerinin kasılma tepkisini in vitro olarak ölçmek için, bir elektrik hücresi-substrat empedans algılama veya ECIS sensör dizisi içeren çok kuyulu bir plaka elde edin. Her dizi, kuyu dibinde bir yalıtım filmi ile tanımlanmış altın film elektrotları içerir. Kuyuları jelatin ile kaplayın.

Kuyulara tohum birincil insan SMC süspansiyonu. ECIS içeren kuyu plakasını, tutucu ile elektrot temasını sağlarken bir amplifikatöre ve veri toplama sistemine bağlı bir plaka tutucuya aktarın. Aralarındaki potansiyeli ölçmek için elektrotlar arasına küçük sabit alternatif akım uygulayın.

İnkübasyon sırasında, SMC'ler jelatin kaplamaya yapışır ve yayılır. Hücreler, elektrotlar arasındaki akım akışını sınırlayan yalıtkan gibi davranır. Yüzeye daha fazla hücre yapıştıkça, akım akışı daha da azalır. Sonuç olarak, empedans veya akım akışına muhalefet ve potansiyel artış. Sonunda, hücreler elektrotlar üzerinde çoğalır ve bir tek tabaka oluşturur.

Hücre zarları boyunca kalsiyum iyonu taşınmasını kolaylaştırmak için SMC'leri bir kalsiyum iyonofor ile muamele edin. Hücre dışı kalsiyum iyonu akışı, kasılma aparatını aktive ederek kasılmaya neden olur.

Uyarılmış SMC'ler büzülür ve elektrotlar üzerindeki hücre-hücre temasını kaybeder. Elektrot yüzey kaplamasında ortaya çıkan azalma, empedansı azaltarak SMC kasılmasının gerçek zamanlı olarak ölçülmesini kolaylaştırır.

Otomatik bir hücre sayacı kullanarak hücreleri sayın ve SMC'leri, jelatin kaplı ECIS plakasındaki 200 mikrolitre SMC ortamında, kuyu başına 30.000 hücre tohumlama yoğunluğunda üç kopya halinde tohumlayın. SMC'lerin bulunduğu plakayı hücre kültürü inkübatöründeki ECIS 96 kuyulu tutucuya yerleştirin.

Programı açmak için "ECIS Applied Biophysics software" üzerine çift tıklayın ve "Setup" düğmesine basın. Tüm elektrotların "Kuyu Konfigürasyonu" etiketli sol alt paneldeki tutucu ile temas edip etmediğini kontrol edin. Elektrotlar düzgün bağlanmamışsa, ölçüme başlamadan önce tutucudaki plakayı ayarlayın.

Şimdi, "Dizi Türü"ne tıklayarak aynı panelde plaka türünü seçin. Ardından, 2 mikrolitre ve 150 mikrolitre hacme ayarlanmış iki pipet hazırlayın. Stimülasyona başlamadan önce, yazılımdaki "İşaretle" tuşuna basın ve bir yorum yapın.

Hücreleri uyarmak için kapağı çıkarın ve inkübatörün içindeki steril bir yüzeye yerleştirin. Ardından, her bir kuyucuğa mümkün olan en kısa sürede 2 mikrolitre iyonomisin çalışma solüsyonu pipetleyerek SMC kasılmasını indükleyin.

Tüm hücreler uyarıldıktan sonra, ikinci pipeti kullanarak ortamı kuyucuklarda karıştırın.

07:04

Kardiyak ve Vasküler Düz Kas Hücrelerinin Elektrofizyolojik Çalışmalar İçin Yetişkin, Genç, Larva ve Embriyonik Zebra Balıklarından İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:56

Vasküler Yanıtları Araştırmak için İntrapulmoner Arter ve Düz Kas Hücrelerinin İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:47

Aort Duvarındaki Biyomekanik Suşu Özetlemek İçin İnsan Aort Düz Kas Hücresi Organ-On-A-Chip Modelinin Yapımı

İlgili videolar

0 Görüntüler

12:30

Elektrik Hücre-substrat Empedans endotel Yayılmasının, Bariyer Fonksiyonu Nicelik için Algılama ve Motilite

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:53

Mikro Silikon konsolun Kullanımı Hücresel kasılma fonksiyonunu değerlendirmek için İn Vitro

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:42

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:19

Derili Kardiyomiyositler Kullanarak Kardiyak Fonksiyonun İn Vitro Değerlendirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:28

Primer Hastaya Özgü Aort Düz Kas Hücrelerinin İzolasyonu ve Yarı Kantitatif Gerçek Zamanlı Kasılma Ölçümleri In Vitro

İlgili videolar

0 Görüntüler

14:33

Mikrodesenli Elastomerler Kullanarak Tek Hücreli Kasılmanın Basitleştirilmiş, Yüksek Verimli Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:30

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Kardiyomiyositler Üzerindeki Mikroelektrot Dizisi ve Yama Kelepçesi Kayıtlarının Teknik Uygulamaları

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 1 Ağustos 2026