Kayan Aktin Filament Deneyi: İmmobilize Miyozinler Üzerinde Aktin Filamentlerinin Translokasyonunu İncelemek İçin Bir İn Vitro Motilite Testi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 6:01 dk. • July 8th, 2025
Miyozin - bir motor protein - başka bir filamentli protein olan aktin ile etkileşime girerek translokasyonuna neden olur.
Aktinin kayma hareketini analiz etmek için, hazne üstünün iç kısmı nitroselüloz kaplı olacak şekilde cam slayt tabanlı bir akış odası monte edin. Miyozin proteinlerini, nitroselüloz kaplama üzerinde hareketsiz hale gelen odadan geçirin.
Hazneyi etiketlenmemiş aktin filamentleri - siyah aktinler - ile destekleyin ve adenozin, trifosfat veya ATP molekülleri içeren bir hareketlilik tamponu ekleyin.
Aktin filamentleri, inaktif veya ölü miyozinlerle birlikte hareketsizleştirilmiş aktif miyoznlara bağlanır. ATP molekülleri aktif miyozinlerle etkileşime girer ve aktif olmayan miyozinler aktine bağlı kalırken siyah aktinlerden ayrışmalarına yol açar.
Siyah aktinlere bağlı aktif olmayan miyoznları peletlemek için santrifüjleyin. Aktif olmayan miyozin peletini, serbest aktin filamentlerini ve kullanılmayan ATP'leri çıkarmak için bir tamponla iyice durulayın. Hareketsizleştirilmiş, aktif miyoznları bağlayan floresan etiketli aktinlerde akış.
Odayı, bir kalabalıklaştırıcı ajan - metilselüloz ve ATP içeren son bir tamponla tamamlayın. Kalabalıklaştırıcı ajan, aktin filamentl
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin