JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:39 dk. • July 8th, 2025
Miyozin - bir motor protein - filamentli bir protein olan aktin ile etkileşime giren küresel bir kafa alanına sahiptir. Bu etkileşim, miyozinin aktin filamentleri boyunca translokasyonu için gereklidir. Bu bağlanmayı in vitro olarak incelemek için, yüzeye bağlı aktin üzerinde ters çevrilmiş bir miyozin motilite testi yapın.
Başlamak için, kaplanmış yüzey içeriye bakacak ve odanın üst kısmını oluşturacak şekilde bir mikroskop lamı üzerine biyotinile polietilen glikol - PEG kaplı bir lamel yerleştirerek bir tahlil odası monte edin.
Bir glikoprotein olan avidin içeren bir çözeltiyi odadan geçirin. Avidin, aktin yapışmasını artıran yüksek afinite ile biyotine bağlanır. Daha sonra, kırmızı bir florofor ile etiketlenmiş biyotin etiketli aktin filamentlerinde akış. Biyotin ligandı avidin'e bağlanarak lamel yüzeyindeki filamentleri hareketsiz hale getirir.
Son olarak, adenozin trifosfat veya ATP molekülleri içeren bir tampona yeşil floresan proteini etiketli miyozin 5A proteinleri ekleyin. Bir takip eden ve bir ön kafa içeren çift başlı miyozin 5A, hareketsizleştirilmiş aktin filamentleri ile etkileşime girer. Miyozinin takip eden başı bir ATP'ye bağlanır ve aktinden ayrılır.
ATP'nin hidro
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin