Floresan Prob Görüntüleme Testi: Reaktif Oksijen Türleri İndükleyici ile Tedavi Edilen Kültürlenmiş Bağırsak Organoid Hücrelerinde Oksidatif Stresi Görselleştirmek İçin Bir Teknik
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:28 dk. • July 8th, 2025
Bağırsak organoidleri, ölü hücreler ve döküntüler içeren merkezi bir lümene sahip bağırsak benzeri kript-villus organizasyonunu özetler. Lümen, villus benzeri hücreler ve kök hücreleri barındıran tomurcuklanan, kript benzeri çıkıntılarla kaplıdır.
Farklı organoid hücreler, birikimi oksidatif strese yol açan metabolik aktivitelerin yan ürünleri olan ROS - değişen seviyelerde reaktif oksijen türleri üretir.
Çeşitli hücrelerde oksidatif stresi görselleştirmek için, bir bodrum matrisinde kültürlenmiş 3D organoidler içeren çok kuyulu bir plaka alarak başlayın. Organoid kök hücreler, görüntüleme sırasında onları ayırt etmeye yardımcı olan yeşil bir floresan proteini veya GFP etiketli proteini ifade eder.
Kuyuları bir ROS indükleyicisi olan tert-bütil hidroperoksit ile destekleyin ve inkübe edin. İndükleyici, zara bağlı NADPH oksidazı aktive eder ve hücrelerin içinde ROS üretimini uyarır. Metabolik olarak aktif olan kök hücreler, farklılaşmış hücrelerden daha fazla ROS üretir.
ROS'a duyarlı florojenik problar ekleyin. Bu lipofilik problar hızla hücrelere girer ve kırmızı floresan üretmek için ROS ile reaksiyona girer. Organoidleri, canlı hücre çekirdeklerini seçici olarak boyayan Hoechst
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin