JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:29 dk. • July 8th, 2025
Bağırsak hücreleri reaktif oksijen türleri üretir - ROS. Orta ROS seviyeleri hücresel homeostazı korurken, yüksek ROS seviyeleri hücre ölümüne neden olabilir.
ROS seviyelerini in vitro olarak ölçmek için, fare bağırsağı 3D organoidleri kültürü ile başlayın. Bu organoidler, yeşil floresan ifade eden kök hücreleri barındıran kript benzeri çıkıntılara sahip bağırsak epitel mimarisi sergiler. Ayrıca, ölü hücreler ve döküntüler içeren merkezi lümeni çevreleyen periferde villus benzeri farklılaşmış hücreler içerirler. Tüm bu hücreler farklı seviyelerde ROS üretir.
Şimdi, belirlenen kuyucuklardaki organoidleri ROS modülatörleri ile tedavi edin. Doğalarına bağlı olarak, modülatörler ROS indükleyicileri veya inhibitörleri olarak işlev görebilir. İstenilen süre boyunca inkübe ettikten sonra, harcanan ortamı çıkarın.
Kültüre proteolitik bir enzim ekleyin, organoidlerin 3D mimarisini bozun ve farklı hücreleri süspansiyon halinde serbest bırakın. Ardından, ROS'a duyarlı bir florojenik prob ekleyin ve inkübe edin.
Hücrelere girdikten sonra, problar ROS ile reaksiyona girer ve kırmızı floresan üretmek için oksitlenir. Hücreleri, ölü hücrelerin çekirdeklerini seçici olarak boyayan ve canlı hücrele
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin