JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 2:59 dk. • July 8th, 2025
Tanımlanmış bir üçüncül yapıya sahip olmayan nükleer yanlış katlanmış proteinler, ubikitin-proteazom sistemi olan UPS dahil olmak üzere proteolitik sistem tarafından bozunmalarını kolaylaştıran küçük ubikuitin benzeri değiştiriciler, SUMO'lar ve ubikuitin molekülleri ile etiketlenir.
Bazı nörodejeneratif hastalıklarda, UPS disfonksiyonu, nükleer yanlış katlanmış proteinlerin birikmesine ve toplanmasına neden olarak nöronal ölüme yol açar.
Nükleer yanlış katlanmış proteinlerin bozunma oranını in vitro olarak araştırmak için, yapışık memeli hücrelerinin bir kültürünü, floresan etiketli yanlış katlanmış protein kodlayan plazmit DNA'sı ve bir transfeksiyon reaktifi içeren bir karışımla tedavi edin.
Başarılı bir şekilde transfekte edilmiş hücreler, bir nükleer lokalizasyon sinyali ile etiketlenmiş floresan etiketli, kısa yarı ömürlü yanlış katlanmış proteinleri eksprese eder. Çekirdeğe taşındıktan sonra, bu yanlış katlanmış proteinler SUMOylation ve ubikitinasyona uğrar ve protein bozunması ve temizlenmesi için UPS'e aktarılır.
İnkübasyon sonrası, ortamı sikloheksimid içeren düşük floresan bir ortamla değiştirin. Hücre geçirgen bir molekül olan sikloheksimid, büyük ribozomal birime bağl
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin