Lusiferaz Testi: Tasarlanmış Nanolusiferaz Sistem Tabanlı Biyomuhabirler Kullanarak Lüminesan Sinyalleri Ölçmek İçin Yüksek Verimli Bir Test
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 2:36 dk. • July 8th, 2025
Lusiferaz, biyolüminesans bir ürün oluşturmak için substratını oksitleyen bir enzimdir.
Lusiferazın bu özelliği, enzimin bölünmüş versiyonunun kullanıldığı nanolusiferaz bazlı bir raportör sistemin tasarlanması için yararlıdır. Bu sistemde, daha küçük ve daha büyük parçalar birbirlerine karşı yüksek bir bağlanma afinitesine sahiptir ve fonksiyonel enzimi yeniden oluşturabilir.
SARS-CoV-2 spike glikoproteininin reseptör bağlanma alanı olan hedef proteini tespit etmek için nanolusiferaz bazlı sistemi kullanmak için, yapışık hücreler içeren bir kültür kabı ile başlayın. Bu hücreler, tasarlanmış nanolusiferazın daha küçük fragmanı için spesifik bir diziyle bağlantılı olarak hedef proteini kodlayan bir plazmit içerir.
İfade üzerine, kültürlenmiş hücreler biyomuhabirler üretir - lusiferazın daha küçük fragmanı ile kaynaşmış rekombinant hedef proteinler. Hücreleri bir lizis tamponu ile tedavi edin ve çalkalama altında inkübe edin. Tampon bileşenleri hücreleri hızla parçalayarak biyo-muhabirler de dahil olmak üzere hücresel içeriği süpernatan içine bırakır.
Süpernatanı çok kuyulu bir tahlil plakasına aktarın. Her bir kuyucuğu, bölünmüş nanolusiferazın büyük parçalarını içeren çözelti ile d
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin