Hücre Bazlı AAV Nötralize Edici Antikor Testi: Serumda Spesifik Adeno İlişkili Virüslere Karşı Nötralize Edici Antikorları Tespit Etmek İçin Kolorimetrik Bir Teknik
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 4:54 dk. • July 8th, 2025
Rekombinant adeno-ilişkili virüsler, rAAV'ler, genetik olarak tasarlanmış, zarfsız, tek sarmallı DNA virüsleri, umut verici terapötik gen taşıyıcılarıdır.
rAAV'ler hedef hücre zarı reseptörlerine bağlanır ve klatrin aracılı endositoza uğrar, bu da rAAV genomunun nükleer iletimini ve terapötik gen ekspresyonunu kolaylaştırır. Bununla birlikte, rAAV'lere karşı yönlendirilen nötralize edici bağışıklık sistemi antikorları, hücre zarı bağlanmasına, hücresel girişe ve gen transferine müdahale ederek spesifik rAAV epitopuna bağlanır.
Koyun serumundaki spesifik rAAV'lere karşı nötralize edici antikorları tespit etmek için önce uygun konsantrasyonlarda seyreltilmiş serum elde edin. İnsan plasental alkalen fosfataz, hPLAP, geni eksprese eden rekombinant AAV'leri ekleyin. Nötralize edici antikorların AAV'leri bağlamasına ve nötralize etmesine izin verin.
Bu karışımı, yapışık insan epitel hücre kültürü içeren çok kuyulu bir plakanın kuyucuklarına aktarın. İnkübasyon üzerine, AAV'ler hücresel endositoza uğrar. Dönüştürülen hücreler, hücre zarına bağlı hPLAP'ı eksprese eder. Ancak, nötralize AAV'ler hücrelere giremez.
Ortamı kuyulardan atın. Hücreleri sabitlemek için paraformaldehit kullanın. Ön
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin