İn Vitro Persister Testi: Osmolitlerin Bakteriyel Kalıcılık Üzerindeki Etkisini Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

Zararlı ortam koşullarına maruz kaldığında, bir bakteri alt kümesi, zararlı etkilerden kaçınarak düşük metabolik aktivite durumuna girer. Kalıcı olarak adlandırılan bu bakteriler, yüksek konsantrasyonlarda antibiyotiklere geçici maruz kalmayı tolere edebilir.

Ozmolitlerin - küçük organik çözünen maddeler - bakteri kalıcılığı üzerindeki etkisini incelemek için, önce, ortamda asılı tutulan, tespit sınırının altında önceden var olan kalıcılarla üstel fazlı bir bakteri hücre kültürü elde edin.

Daha sonra, süspansiyonu bir mikrodizi plakanın ozmolit içeren kuyucuklarına aktarın. Kontrol olarak ozmolit içermeyen bir dizi kuyu tutun. Hücre büyümesi ve inkübe edilmesi için hızlı gaz difüzyonuna izin vermek için plakayı gaz geçirgen bir zarla kapatın.

Uygun konsantrasyonlarda ortamdaki ozmolitler ozmotik stresi indükleyerek bazı hücrelerin hücresel metabolizmalarını hızlıdan yavaş büyümeye doğru yeniden programlamalarını tetikleyerek kalıcılar oluşturur.

Şimdi, ozmolit ile muamele edilmiş ve kontrol hücrelerini antibiyotik içeren kalıcı bir tahlil plakasına aktarın. Kalıcı tahlil plakasını kapatın ve inkübe edin.

Antibiyotiklerin varlığında, normal hücreler hücre ölümüne uğrarken, antibiyot