Bakteriyel Ko-İnkübasyon Testi: Tek Hücre Düzeyinde Spesifik Dışı Bakteriyel Rekabeti Görselleştirmek için Floresan Mikroskobu Tabanlı Bir Teknik

İki bakteri suşu arasındaki tür içi rekabet, inhibitör suşun hedef popülasyonu öldüren toksik efektör molekülleri serbest bırakmasına neden olur.

İki gram negatif bakteri suşu arasındaki rekabetçi etkileşimleri görselleştirmek için, eşit miktarlarda bir inhibitör ve bir hedef suş içeren bir ko-kültür ile başlayın.

Her iki suş da, görüntüleme sırasında onları görsel olarak ayırt etmek için farklı renkli floresan proteinleri eksprese etmek üzere tasarlanmıştır. Bakteri suşları arasındaki hücreden hücreye teması en üst düzeye çıkarmak için kültürü konsantre edin. Karışık kültürü bir tabağın dibine yerleştirilmiş bir lamel üzerine yerleştirin.

Lekenin üzerine katılaşmış bir agaroz ped yerleştirin, bakterilerin hareketsiz hale gelmesine izin verin ve başka bir lamel ile örtün. Bakteri büyümesine izin vermek için inkübe edin, bakteri kalabalık koşullarını simüle edin.

İnhibitör suşun hücre zarfı, özel bir salgı sistemi içerir - tip altı salgı sistemi veya T6SS. Bir zar kompleksi, bir taban plakası ve kasılma kılıfı ile çevrili bir iç tüp içerir.

Temas tespit edildiğinde, inhibitör suşu, kılıfın kasılmasına ve tüpün dışarı atılmasına neden olan ve sonuçta hedef bakteri hücre zarının delin