Amplifiye Lüminesan Yakınlık Homojen Deneyi: Protein-Protein Etkileşimlerini İnhibe Eden Küçük Molekülleri Taramak için Boncuk Tabanlı Bir Yakınlık Testi

Biyolojik sistemlerde, bir proteinin spesifik ortağına yakınlığı, başarılı protein-protein etkileşiminin çok önemli bir belirleyicisidir. Küçük inhibitör moleküller mevcut olduğunda, bu proteinler birbirlerine yaklaşamazlar ve etkileşimlerini bozarlar.

İki protein arasındaki etkileşimleri bozmak için inhibitör molekülleri taramak için - bir şaperon ve ko-şaperon - çeşitli küçük moleküller içeren çok kuyulu bir plaka alın. Kuyucukları, yüzeylerine yardımcı refakatçiler takılmış donör boncuklarla destekleyin. Bu boncuklar, kemilüminesans testi için ışığa duyarlılaştırıcılar içerir.

Özellikle ko-şaperona bağlanan şaperondan türetilmiş peptit dizilerine konjuge edilmiş bir alıcı boncuk bulamacı ekleyin. Boncuklar, görselleştirme için gerekli olan tioksen bazlı bir boya ve floroforlar içerir.

İnhibitör olmayan moleküllere sahip kuyucuklarda, şaperon bağlayıcı peptitler ve ko-şaperonlar arasındaki yüksek afiniteler, alıcı ve verici boncukları çeker. İnhibitörler mevcut olduğunda boncuklar uzak kalırken.

Bir kemilüminesans okuyucu kullanarak etkileşimi inceleyin. Belirli bir dalga boyunda aydınlatma üzerine, donör boncuk ışığa duyarlılaştırıcılar oldukça reaktif singlet oksijenler yayar.