JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 5:32 dk. • July 8th, 2025
Mikrobiyal patojenle enfekte olmuş konak hücreler apoptozla programlanmış hücre ölümüne uğrar. Apoptoz sırasında, DNazlar kromozomal DNA'yı küçük parçalara ayırarak hücre ölümüne yol açar.
TUNEL testini kullanarak apoptozu tespit etmek için, bir mantar patojeni ile enfekte olmuş deparafinleştirilmiş ve rehidre edilmiş bir cilt dokusu bölümü olan bir cam slayt alın.
Hücresel DNazları etkisiz hale getirmek için dokuyu proteinaz-K ile tedavi edin ve analiz sırasında DNA'yı potansiyel olarak bozmalarını önleyin. Reaksiyonu söndürmek için hidrojen peroksit ekleyin ve reaksiyona girmemiş proteinaz-K'yi çıkarmak için slaydı yıkayın.
Digoksigenin etiketli deoksi-üridin trifosfatlar veya dUTP'ler içeren bir tampon ekleyin. Bir terminal deoksinükleotidil transferaz, TdT enzimi ile destekleyin ve inkübe edin. Apoptotik hücrelerde, TdT enzimi, etiketli dUTP'lerin parçalanmış DNA'nın açıkta kalan 3'-hidroksil gruplarına bağlanmasını katalize eder.
Daha sonra, bir rodamin raportörüne konjuge edilmiş bir anti-digoxigenin antikoru ekleyin ve görüntüleme sırasında kırmızı floresan veren digoksigenin etiketli dUTP'lere antikor bağlanmasını kolaylaştırmak için karanlıkta inkübe edin.
Çekirdeği görsel
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin