JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 4:48 dk. • July 8th, 2025
Makrofajlar, fagositoz ile apoptoz programlanmış hücre ölümü geçiren hücreleri temizleyen özel bağışıklık hücreleridir.
Apoptotik hücre yutulmasını değerlendirmek için, hemositler - omurgasız makrofajlar tarafından yutulan apoptotik cisimler de dahil olmak üzere sabit Drosophila embriyonik hücrelerini içeren bir cam slaytla başlayın.
İlk olarak, hücrelere spesifik olmayan bölgeleri bloke eden bir bloke edici reaktif uygulayın. Croquemort reseptörlerini bağlayan birincil antikorları ekleyin - hemositlerin fagositik belirteçleri. Fazla antikorları yıkayın.
Birincil antikorlara bağlanan alkalin fosfataz işaretli ikincil antikorları ekleyin. Şimdi, lam üzerine uygun bir kromojenik substrat çözeltisi ekleyin ve inkübe edin. İnkübasyon sırasında, alkalin fosfataz, hemositlerde mor lekeli granüller elde etmek için kromojenik substrat ile reaksiyona girer.
Daha sonra, terminal deoksinükleotidil transferaz, TdT enzimi ve digoksijenine bağlı nükleotidleri içeren bir reaksiyon karışımı ekleyin. TdT, digoksigenine bağlı nükleotidlerin, apoptotik cisimlerdeki parçalanmış DNA'nın açıkta kalan 3' OH uçlarına bağlanmasını katalize eder.
Daha sonra, DNA hasarı bölgesindeki nükleotidlere bağlanan pe
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin