JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 7:16 dk. • July 8th, 2025
Mayoz bölünmenin profaz-I'indeki oositler transkripsiyonel olarak aktiftir; mRNA'lar üretirler ve bunları hareketsiz bir formda depolarlar. Olgunlaşma sırasında, oosit metafaza girerken, depolanan mRNA'lar proteinlere çevrilir.
mRNA'nın translasyonunu incelemek için, bir damla ortamda asılı kalan faz-I tutuklu fare oositleri ile başlayın. Tutma pipetini yerinde tutmak için tek bir oositin yakınına yerleştirin.
Raportör karışımı içeren bir mikro enjeksiyon pipeti alın. Bu karışım iki farklı mRNA türü içerir, biri sarı floresan proteini kodlayan veya YFP - hedef genin 3'-çevrilmemiş bölgesi ile kaynaşmış bir raportör - ve kırmızı floresan proteini kodlayan bir poliadenillenmiş mRNA.
Raportör karışımını oosit içine enjekte edin. Mikroenjekte edilen oositleri, faz-I tutuklamasını koruyan kimyasal bir inhibitör olan silostamid ile takviye edilmiş bir olgunlaşma ortamında inkübe edin.
Oosit, kırmızı floresan yoğunluğu bir platoya ulaşana kadar poliadenillenmiş mRNA'yı çevirirken, poliadenilasyon kuyruğu olmayan YFP kodlayan mRNA seviyeleri bu şekilde kalır.
Tedavi edilen oositleri silostamid içermeyen bir olgunlaşma ortamına aktarın, bu da mayozun devam etmesine yardımcı olur; ve hedef m
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin