Membran ile Hücreye Nüfuz Eden Peptit Etkileşimini İncelemek için Floresan Sızıntı Testi

Hücreye nüfuz eden peptitler, CPP'ler, kısa, pozitif yüklü peptitler, hücre geçirimsiz kargoların verilmesini kolaylaştırarak hücre zarlarıyla etkileşime girebilir ve onları geçebilir.

Bir

hücre zarı taklidi kullanarak in vitro bir test CPP'sinin zar geçirgenleştirme potansiyelini incelemek için, büyük bir uniilamellar vezikül, LUV, süspansiyon ile başlayın.

LUV'ler, membran geçirimsiz bir floresan prob ve karşılık gelen söndürücü çifti ile yüklenmiş bir fosfolipid çift tabakası içerir. Veziküller içinde, söndürücü, yakınlıkları nedeniyle floresan prob ile etkileşime girerek floresan söndürmeye neden olur.

LUV süspansiyonunu bir kuvars floresan küvetine pipetleyin ve tampon kullanarak seyreltin. Manyetik bir çubuk ekleyin. Çalışma sırasında LUV sedimantasyonunu önlemek için manyetik karıştırmalı bir spektroflorometreye aktarın. Herhangi bir LUV sızıntısını ortadan kaldırmak için arka plan floresansını belirleyin.

İstenilen CPP konsantrasyonunu LUV süspansiyonuna düzenli aralıklarla ekleyin.

CPP'lerin amino asit kalıntılarının hidrofobikliğine ve yüküne bağlı olarak, LUV lipid zarını bozarak zar penetrasyonuna ve geçirgenleşmeye yol açarlar.

Vezikül zarı hasarı, floresan probun sızm