JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 5:09 dk. • July 8th, 2025
Bir bitki dokusundaki, bir tüpteki çözünür protein içeriğini ölçmek için, uygun miktarda öğütülmüş, liyofilize bitki dokusu ile başlayın.
Tüpe bir alkali olan sodyum hidroksit ekleyin ve sonikat ekleyin. Mekanik kuvvetlere sahip alkali ortam, hücreleri bozar ve makromoleküller - çözünür proteinler ve karbonhidratlar dahil olmak üzere hücre içi içerikleri serbest bırakır. Daha yüksek sıcaklıklarda inkübe edin.
Isı varlığında, alkali protein hidrolizine neden olur, daha küçük peptitler oluşturur ve protein çözünürlüğünü arttırır. Ek olarak, karbonhidratlar bozulur.
Karışımı santrifüjleyin. Çözünmüş protein içeren süpernatanı toplayın. PH'ı nötralize etmek için hidroklorik asit ekleyin.
Numuneyi trikloroasetik asit, TCA ile muamele edin. TCA, proteinleri çevreleyen hidrasyon kabuğunu bozarak protein toplanmasına ve çökelmesine yol açar.
TCA içeren süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın. Çözünür protein tahminini engelleyebilecek kalıntı TCA'yı gidermek için protein peletini buz gibi soğuk asetonla yıkayın.
Asetonu havayla kurutun. Protein peletini sodyum hidroksit içinde yeniden süspanse edin. Deiyonize su ile seyreltin. Çok kuyulu bir plakanın kuyularına aktarın.
Asidik bir Coomassie
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin