Bitki Dokularında Yapısal Olmayan Karbonhidratların Miktar Tayini için Kolorimetrik Test

Sindirilebilir karbonhidratlar, bitki dokusunun yapısal olmayan bileşenleridir ve bitki büyümesi ve metabolizması için yedek bir enerji kaynağı olarak işlev görürler.

Yapısal olmayan karbonhidratları ölçmek için, bir tüpte ölçülen miktarda bitki dokusu alın. Tüpe seyreltilmiş sülfürik asit ekleyin ve numuneyi ısıtın. Isıtıldıktan sonra sülfürik asit, sindirilebilir karbonhidratların polisakkaritlerini ilgili monosakkarit alt birimlerine hidrolize eder.

Numuneyi soğutun. Sindirilmemiş bitki materyalini peletlemek için tüpü santrifüjleyin ve monosakkaritleri içeren bir süpernatant elde edin.

Süpernatanı yeni bir tüpe aspire edin ve monosakkaritleri fenol çözeltisi ile muamele edin, ardından sülfürik asit ilavesi yapın. İçeriği karıştırmak ve inkübe etmek için tüpü girdaplayın.

İnkübasyon sırasında sülfürik asit, furfural türevler üretmek için monosakkaritleri dehidre eder. Bu furfural türevleri, sarı-altın bir çözelti üretmek için fenol ile reaksiyona girer.

Bitki örneğindeki karbonhidrat içeriğine karşılık gelen 490 nanometrede sarı-altın çözeltisinin emilimini spektroskopik olarak belirleyin.

Daha sonra, çeşitli konsantrasyonlarda glikoz çözeltileri alın ve farklı renk yoğunlukları elde etmek için fenol-sülfürik asit muamelesini tekrarlayın ve standart bir eğri çizin. Bitki dokusundaki sindirilebilir karbonhidratların içeriğini elde etmek için bilinmeyen karbonhidrat örneğinin absorbans değerini glikoz standardı ile karşılaştırın.

İlk olarak, her doku örneğinden kopyaları 15 mililitrelik cam tüplere tartın. Tüpleri etiketleyin ve her numunenin tam kütlesini kaydedin.

Daha sonra, her tüpe 1 mililitre 0.1 molar sülfürik asit ekleyin ve kapakları sıkıca kapatın. Daha sonra tüpleri 1 saat kaynar su banyosuna koyun.

Tüpleri soğuması için ılık bir su banyosuna aktarın. Ardından, tüplerin içeriğini etiketli 1.5 mililitrelik mikrosantrifüj tüplerine dökün. Bundan sonra, tüpleri 10 dakika boyunca 15.000 g'da santrifüjleyin. Süpernatanı yeni etiketli 1,5 mililitrelik tüplere aktarmak için bir mikropipet kullanın.

Bir pipet kullanarak, bilinmeyen her numuneden 15 mikrolitreyi kendi test tüpüne aktarın. Ardından, her tüpe 385 mikrolitre damıtılmış su ekleyin.

Bir davlumbazda, her standart ve bilinmeyen numune test tüpüne 400 mikrolitre %5 fenol ekleyin. Hemen ardından, her tüpe 2 mililitre sülfürik asit ekleyin.

Sülfürik asidi çözeltinin yüzeyine eklediğinizden emin olun.

Tüpleri 10 dakika inkübe ettikten sonra, tüpleri girdaplayın. Ardından, tüpü 30 dakika daha inkübe edin.

Her numune tüpünden 800 mikrolitreyi üç polistiren 1,5 mililitrelik yarı mikro küvete aktarın. Ardından, spektrofotometreyi 490 nanometrede okuyacak şekilde ayarlayın ve boş bir küvet ile kalibre edin.

Son olarak, her küveti spektrofotometreden geçirin ve absorbansı kaydedin.