JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:34 dk. • July 8th, 2025
Tek hücreli bir protozoan olan Toxoplasma gondii, yalnızca konakçı hücrelerin içinde çoğalan zorunlu bir anaerobik parazittir.
Lusiferaz bazlı bir tahlil kullanarak parazitin hücre içi büyümesini ölçmek için, substratı ile reaksiyona girdiğinde lüminesans üreten bir enzim olan lusiferazı eksprese eden parazit hücrelerinin bir süspansiyonunu alın. Süspansiyonu bir insan sünnet derisi fibroblast kültürüne ekleyin ve yeterli bir süre inkübe edin.
Parazit, konakçı hücre reseptörlerine bağlanır ve endositik bir süreçle içselleştirilir ve parazitoforöz bir vakuol oluşturur. Yapı, parazitin üremesi için bir niş sağlar.
Enfeksiyon sonrası, içselleştirilmemiş parazitleri uzaklaştırarak ortamı aspire edin. Bir deterjan ve lusiferin içeren bir lizis tamponu ekleyin - lusiferaz için bir substrat. Tampondaki deterjan, hücre zarında gözenekler oluşturur ve hücreleri tamamen parçalayarak lusiferaz salınımına neden olur.
Serbest bırakılan enzim, lusiferin moleküllerini oksitleyerek ışık yayar. Lusiferaz aktivitesini belirlemek için lüminesans yoğunluğunu ölçün. Enfekte konakçı hücreleri içeren replikasyon kuyucuklarını kullanarak, enfeksiyon sonrası önceden belirlenmiş aralıklarla lusiferaz aktivi
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin