Parazitlerde İlaca Bağlı Sitotoksisiteyi Değerlendirmek için β-Galaktosidaz Testi

Zorunlu bir hücre içi parazit olan tripanosoma cruzi, memeli konakçı hücrelerini tripomastigot - kamçılı, proliferatif olmayan gelişim aşaması - olarak istila eder ve ikili fisyon yoluyla sitoplazmada çoğalan kamçılı olmayan amastigotlara farklılaşır.

Proliferasyonu takiben, amastigotlar, konakçı hücrelerin dolaşıma girmesini bozan ve sistemik enfeksiyona neden olan tripomastigotlara geri döner.

Trypanosoma cruzi'ye karşı bir test antiparaziter ilacının in vitro sitotoksik potansiyelini değerlendirmek için, istenen gelişim aşamasında - β-galaktosidaz enzimini stabil bir şekilde eksprese eden bir transgenik Trypanosoma cruzi parazitleri kültürü ile başlayın.

Parazitleri uygun ortamda askıya alın. Çok kuyulu bir plakaya aktarın. Test antiparaziter ilacın uygun konsantrasyonlarını ekleyin. Kuluçkaya yatmak.

İlaç pasif olarak parazit zarlarından yayılır ve toksik ara ürünlere metabolize edilir. Bu metabolitler çekirdeğe girer ve DNA hasarına neden olarak β-galaktosidaz da dahil olmak üzere protein sentezini inhibe ederek parazit canlılığını olumsuz etkiler.

Absorbans ölçümü sırasında renk girişimini önlemek için ilaç içeren ortamı tamponla değiştirin. İyonik olmayan, hafif deterjanla d