JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 4:57 dk. • July 8th, 2025
Zebra balığında, ortamdaki ince partikül madde veya bir hava kirleticisi olan PM, oksidatif strese bağlı kardiyak fonksiyon bozukluğuna neden olur.
PM'nin zebra balığı üzerindeki etkisini incelemek için, zebra balığı embriyolarını, reaktif oksijen türlerinin veya ROS'un oluşumunu tetikleyen PM'den türetilmiş, ekstrakte edilebilir organik maddeye, EOM'ye maruz bırakarak başlayın.
ROS, DNA bazı guanini 8-hidroksi-2-deoksiguanozin veya 8-OHdG'ye oksitler ve histon H2AX'in fosforilasyonunun γH2AX oluşturmasına neden olur - DNA çift iplikli kırılmalar için bir işaretleyici
.Pozlama sonrası, zebra balığı kalbini inceleyin ve bir cam slayt üzerine yerleştirin. Kalbi, proteinleri çapraz bağlayan ve hücresel yapıyı stabilize eden fiksatif bir çözelti ile tedavi edin.
Ardından, spesifik olmayan bağlanma bölgelerini önlemek için bir engelleme reaktifi ekleyin. Kalp hücrelerinde γH2AX ve 8-OHdG'yi hedefleyen birincil antikorları ekleyin.
Daha sonra, ilgili birincil antikorlarının Fc bölgesine spesifik olarak bağlanan iki farklı renkli floresan etiketli ikincil antikor ekleyin. Son olarak, örneği, bir floresan kompleksi oluşturmak için DNA'daki AT açısından zengin dizilerin küçük oluğuna bağlan
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin