Epileptiform aktiviteyi kaydetmek için elektroensefalografi tabanlı kayıt tekniği

Bir nörondan salınan kimyasal nörotransmiterler, komşu hücreleri etkileyerek elektriksel uyarıların nöronlar arasında geçmesine izin verir. Uyarıcı nörotransmiterlerin fazlalığı beynin elektriksel aktivitesinde bozukluklara neden olarak tekrarlayan nöbetlere yol açar - anormal tekrarlayan nöron uyarımı ve kademeli nöronal ölüm, epilepsiye yol açar.

Epileptiform aktiviteyi ex vivo olarak kaydetmek için, gelişen epileptik olayları gösteren sıçan yavrusu beyninden türetilmiş, rinal korteks-hipokampus organotipik dilimleri içeren bir zar eki alarak başlayın. Her dilim, sıkıca paketlenmiş çok kutuplu piramidal nöronlardan oluşan tanımlanmış bir dentat girus - DG bölgesi ve cornu ammonis - CA bölgesine sahiptir.

İn vivo epileptik koşullara benzeyen, nöronal ölüme yol açan kademeli serum yoksunluğunun neden olduğu stres koşullarını simüle ederek dilimleri uzun süre kültürleyin. Bir organotipik dilimi, hipokampus odanın dibine değecek şekilde ayarlanmış bir elektrofizyoloji - EEG'nin kayıt odasına yerleştirin.

Kayıt odası, nöronal uyarımı başlatan bir nörotransmitter öncüsü olan L-glutamin içeren bir ortamla önceden doldurulur. Yapay beyin omurilik sıvısı içeren bir cam kılcal damara bağlı alıcı elektrodu, piramidal nöron açısından zengin bir CA3 bölgesine yerleştirin.

Elektriksel aktiviteyi kaydedin. Epileptiform aktivitenin başlangıcına karşılık gelen iktal olayları - ani zirveleri olan alanları - kısaca gösteren bir elektrograf oluşturun.

Uzun süre devam eden iktal olayların sayısının artması, tekrarlayan nöbetleri gösterir.

Elektrofizyoloji kurulumunu kapalı bir devrede hazırlayın. Arayüz tipi haznenin akış hızının dakikada iki mililitre olarak ayarlandığını doğrulayın ve carbox valfini açın. Sistemdeki su seviyesini kontrol edin ve fazla ortamı boşaltmak için arayüz kayıt odasına bir parça filtre kağıdı yerleştirin.

Dilime ortam sağlamak için çerçevenin altına bir parça lens temizleme temizleme kağıdı yerleştirin ve sıcaklık kontrol cihazını, amplifikatörleri ve mikro manipülatörleri açın.

Cam elektrodu yeni hazırlanmış yapay beyin omurilik sıvısı ile doldurmak için bir şırınga kullanın. Cam elektrodu alıcı elektroda yerleştirin ve arayüz odasındaki sıcaklığın 37 santigrat derecede sabitlenmesini bekleyin.

Bir biyogüvenlik kabininde çalışarak, eki bir damla orta ile 60 milimetrelik bir plakaya yerleştirin. Ek parçadan bir dilim kesmek için keskin bir bıçak kullanın ve dilimi, hipokampus sağ altta olacak şekilde arayüz odasına yerleştirin. Ardından, alıcı elektrodu CA3 piramidal hücre katmanına yerleştirin.

Sürekli alım protokolünü başlatın ve dilimi 30 dakika boyunca kaydedin.