Ex Vivo Epilepsi Modelinde Hücre Ölümünü Değerlendirmek İçin Nöronal Ölüm Testi

Epilepsi - beyinde spontan ve tekrarlayan nöbetler - nöronal hücre ölümüne yol açar.

Bir ex vivo epilepsi modelinde nöronal ölümü incelemek için, uygun bir ortamda bir sıçan yavrusu beyninden hazırlanan bir rhinal korteks-hipokampus organotipik dilimi alarak başlayın.

Organotipik dilim, rinal korteks ve hipokampustan oluşur. Kademeli serum yoksunluğu altında, bu bölgeler nöbet kaynaklı nöronal ölüme yol açan gelişen epileptik olayları gösterir.

Kültüre gerekli miktarda propidyum iyodür, PI - bir floresan boya - ekleyin ve inkübe edin. Hasarlı hücre zarından PI ölü nöronlara girer ve DNA'ya bağlanır; Sağlam zara sahip canlı nöronlar PI alımına muktedir değildir.

İmmün boyama için organotipik dilimi bir mikroskop lamına yerleştirin. Geçirgenliği bloke eden çözelti ekleyin ve inkübe edin.

Çözeltideki deterjan molekülleri, zar lipitlerini çözündürür, sağlam hücrelerin zarında gözenekler oluşturur ve onları sonraki immün boyama adımları için geçirgen hale getirir. Bloke edici çözeltideki proteinler, hücrelerin spesifik olmayan bölgelerine pasif olarak bağlanır ve arka plan lekelenmesini azaltır.

Nöronların içine nüfuz eden ve nükleer matriste dağıtılan nörona özgü nükleer antijene (NeuN